利用二化螟内源microRNA csu-miR260培育抗二化螟水稻

发布时间：2023-04-02 20:25

　　水稻是最为重要的粮食作物之一,而二化螟是最为常见的一种水稻害虫,每年都会造成巨大的经济损失。目前水稻生产上二化螟的防治主要依赖化学杀虫剂,然而由此产生的环境污染、生态破坏、食品安全以及害虫耐药性等问题较为突出。因此,培育抗二化螟水稻品种来代替化学杀虫剂防治方法尤为重要。随着RNA干扰(RNAi)技术的不断地发展与成熟,其中人工micro RNA(artificial micro RNA,amiRNA)技术的高效率、精准作用靶点等优点,被认为是一种极具潜力的控制农作物害虫的新策略。在前期工作中,我们利用已鉴定的二化螟内源micro RNA序列csu-miR260构建amiRNA表达载体并转化水稻,获得了两个纯合的单拷贝插入的转基因水稻家系csu260-16-4和csu260-18-2。室内喂饲表明,这两个转基因水稻家系对二化螟幼虫有较好的抗性。在前期研究的基础上,本研究进一步获得了以下主要研究结果。1.运用高通量小RNA测序技术对转基因水稻csu260-16-4和csu260-18-2进行测序,结果表明与转入的amiRNA表达载体所匹配的小RNA长度集中在20～21nt,符合天然miRN...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
    1.1 水稻抗虫技术发展
    1.2 水稻二化螟研究
        1.2.1 二化螟的生物学特征
        1.2.2 二化螟的灾害现状
    1.3 RNA干扰
        1.3.1 dsRNA介导的RNA干扰
        1.3.2 miRNAs介导的RNA干扰
        1.3.3 piRNAs介导的RNA干扰
    1.4 RNA干扰技术在植物抗虫育种中的应用
    1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 dsRNA干涉载体的构建
    2.3 水稻的遗传转化
    2.4 转基因植株的阳性检测
    2.5 转基因植株amiRNA表达量的检测
    2.6 转基因植株dsRNA表达量的检测
    2.7 csu260 代表转基因家系的小RNA测序
    2.8 室内抗虫性鉴定试验
        2.8.1 短期转基因水稻茎秆接虫试验
        2.8.2 转基因水稻茎秆连续喂饲试验
        2.8.3 amiRNA agomir离体饲喂试验
    2.9 田间抗虫性鉴定试验
        2.9.1 amiRNA转基因水稻分蘖期田间抗虫性鉴定
        2.9.2 amiRNA转基因水稻抽穗期田间抗虫性鉴定
    2.10 二化螟取食amiRNA水稻后靶基因表达量的检测
3 结果与分析
    3.1 csu260 代表转基因家系的小RNA测序
    3.2 miRNA agomir饲喂二化螟实验
    3.3 csu260转基因植株连续饲喂抗虫性鉴定
    3.4 csu260转基因水稻田间抗虫性鉴定
        3.4.1 csu260转基因水稻分蘖期田间抗虫性鉴定
        3.4.2 csu260转基因水稻抽穗期田间抗虫性鉴定
    3.5 dsRNA转基因植株获得及PCR阳性检测
    3.6 RNAi转基因水稻茎秆饲喂二化螟进行抗性鉴定
4 讨论
    4.1 agomir的饲喂及靶基因检测实验
    4.2 csu260转基因材料的抗虫性鉴定分析
    4.3 dsRNA和 miRNA干涉效果对比
    4.4 后续实验计划
参考文献
致谢



本文编号：3779888