褐飞虱长链非编码RNA基因BPHOGS10005591-OT2的表达及功能分析

发布时间：2023-04-26 18:59

　　褐飞虱(Nilaparvata lugns,BPH)是一种重要的水稻害虫。在实验室前期研究工作中,长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)分析发现,BPHOGS10005591-OT2跟褐飞虱繁殖力相关,葡糖脱氢酶(Glucose dehydrogenase,GLD)基因控制果蝇受精囊的存精能力,发现lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2与GLD基因在基因组的位置上发生重叠,且表达具有相关性。本文进一步对lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2和GLD基因进行了克隆,检测了基因表达,进行RNAi干扰分析等,对褐飞虱繁殖力分子机制的调控及昆虫lncRNA均具有重要的参考价值。1.lncRNA及其相邻蛋白编码基因的验证对褐飞虱12个不同转录组测序、预测及分析得到了 1882条lncRNA。为确定lncRNA的方向性,从中任选17条进行链特异性PCR验证。结果表明:17条中16条成功验证,其中,12条的转录方向为3’端,4条的转录方向为5’端,1条未扩增出目的条带。经预测得到了 BPHLNC-unc241基因有10个不同的转录本,为了确...

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词中英文对照
第一章 文献综述
    1 褐飞虱简介
        1.1 形态特征
        1.2 褐飞虱的生活习性
        1.3 褐飞虱的发生规律
        1.4 褐飞虱的危害
        1.5 褐飞虱的防治策略
    2 长链非编码RNA简介
        2.1 非编码RNA研究进展
        2.2 非编码RNA的类型
        2.3 lncRNA定义
        2.4 lncRNA的作用机制
        2.5 lncRNA的生物学功能
        2.6 lncRNA在昆虫学中的研究进展
        2.7 动物繁殖领域lncRNA的研究现状
        2.8 lncRNA在昆虫学中的未来展望
    3 RNA干扰
        3.1 RNA干扰的简介及发现
        3.2 RNA干扰的生物学特性
        3.3 RNA干扰作用机制
        3.4 RNA干扰的应用
第二章 褐飞虱lncRNA及蛋白编码基因的验证
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂和仪器设备
        1.2 总RNA提取
        1.3 cDNA的合成
        1.4 引物设计
        1.5 普通PCR反应
        1.6 分子克隆
    2 结果与分析
        2.1 17条lncRNA的链特异性PCR验证图
        2.2 BPHLNC-unc241可能发生选择性剪接的十条转录本验证图
        2.3 3条lncRNA和与之重叠的蛋白编码基因的验证图
        2.4 讨论与分析
第三章 褐飞虱3条lncRNA与其邻近蛋白编码基因的克隆
    1. 材料与方法
        1.1 昆虫饲养及试虫材料提取
        1.2 主要仪器和试剂
        1.3 褐飞虱总RNA提取及cDNA合成
        1.4 引物设计
        1.5 RACE PCR反应
        1.6 分子克隆
        1.7 序列测定与分析
    2 结果与分析
        2.1 cDNA的克隆
        2.2 GLD基因的系统进化树分析
    3 讨论
第四章 褐飞虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的表达分析
    1 材料与方法
        1.1 实验试虫的饲养
        1.2 主要仪器设备与试剂耗材
        1.3 褐飞虱成虫不同天数的搜集
        1.4 总RNA提取
        1.5 去基因组cDNA的合成
        1.6 引物设计
        1.7 实时荧光定量PCR反应
        1.8 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 定量引物验证
        2.2 GLD基因在成虫不同日龄的表达情况
        2.3 lncRNA在成虫不同日龄的表达情况
    3 讨论
第五章 褐飞虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的RNA干扰分析
    1
        1.1 供试昆虫的饲养
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 褐飞虱活体注射
        1.5 总RNA提取
        1.6 cDNA的合成
        1.7 qRT-PCR引物设计
        1.8 qRT-PCR检测干扰效率
        1.9 褐飞虱表型观察
    2 结果与分析
        2.1 siRNA干扰后GLD基因及BPHOGS10005591-OT2的表达变化及表型分析
        2.2 注射后褐飞虱后代数量观察
    3 讨论
全文总结
参考文献
攻读硕士学位期间学术论文发表情况
致谢



本文编号：3802038