棉铃虫双重氧化酶HaDuox的序列特征和表达及病原诱导分析

发布时间：2023-06-18 02:53

　　【目的】探索棉铃虫双重氧化酶在昆虫肠道防御机制中的作用。【方法】克隆棉铃虫HaDuox编码区基因,并利用生物信息学方法分析其编码的氨基酸序列;构建HaDuox膜外1 117到1 770 bp编码基因的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达特异性蛋白;采用实时荧光定量PCR技术分析棉铃虫幼虫不同组织和不同发育时期HaDuox基因的转录水平;通过测定基因相对表达量研究棉铃虫HaDuox基因对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)诱导的免疫响应。【结果】棉铃虫HaDuox基因开放阅读框长4 497 bp,编码1 498个氨基酸,预测编码蛋白的相对分子量为171.91 kD。HaDuox与家蚕、橘小实蝇、意大利蜜蜂等昆虫的双重氧化酶结构域类似,含有过氧化物酶结构域,钙离子结合域,铁还原结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸结合域和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸结合域。有7个跨膜区,在第29个和第30个氨基酸位点之间存在一个信号肽切割位点。HaDuox膜外片段在大肠杆菌中成功表达约25 kD的重组蛋白。实时荧光定量PCR结果显示HaDuox基因在马氏管和卵期表达...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料和试剂
        1.1.1 供试材料
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方 法
        1.2.1 RNA的提取与cDNA的合成
        1.2.2 棉铃虫HaDuox编码区基因的克隆
        1.2.3 棉铃虫HaDuox基因序列分析
        1.2.4 HaDuox蛋白膜外部分编码基因的原核表达
        1.2.5 棉铃虫HaDuox的表达模式分析
        1.2.6 HaDuox基因的病原诱导表达分析
2 结果与分析
    2.1 棉铃虫HaDuox基因的克隆及序列分析
    2.2 棉铃虫HaDuox系统发育分析
    2.3 棉铃虫HaDuox蛋白膜外部分编码基因的原核表达
    2.4 棉铃虫HaDuox的表达模式分析
    2.5 棉铃虫HaDuox的病原诱导分析
3 讨 论



本文编号：3834636