黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子致病性研究

发布时间：2023-08-06 13:36

　　黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)属于帚状病毒科(Virgaviridae)烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的成员。该病毒系种子传播,对葫芦科作物危害较大,在我国尤其是嫁接西瓜易发生该病毒病害,防治难度较大,已列为我国检疫性病害。为更好的了解和防御该病毒,本文通过构建该病毒的侵染性克隆,采用定点突变技术对CGMMV各编码蛋白进行突变,分析突变体产生症状以及发病时间的影响,探明病毒基因组中致病的分子决定簇,以加深人们对该病毒致病分子机理的认识,为防御该病毒病害提供新的思考和路径。主要研究结果如下:(1)构建了CGMMV的侵染性克隆。由于病毒侵染性克隆构建技术仍是病毒学研究的一个瓶颈,本文除选用CGMMV为研究对象外,也采用了葫芦科病毒小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)作为材料,以便能够更好地探讨病毒侵染性克隆构建的技术。利用传统的酶切连接方法获得CGMMV的侵染性克隆p XT1-CGMMV...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒研究进展
        1.1.1 病原生物学特征及其基因组结构
        1.1.2 寄主范围及分布情况
        1.1.3 传播方式
        1.1.4 检测技术
        1.1.5 病毒侵染性克隆的构建及其应用
        1.1.6 各编码蛋白对病毒致病性的影响
    1.2 烟草花叶病毒属研究进展
        1.2.1 基本生物学特性和基因组结构
        1.2.2 分类地位
        1.2.3 病毒种类及分类
        1.2.4 侵染过程及其机制
    1.3 回复突变对病毒致病性的影响
    1.4 本研究的内容和意义
第二章 黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染性克隆的构建
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 实验材料
        2.1.3 菌株和载体
        2.1.4 主要试剂和试剂盒
    2.2 实验方法
        2.2.1 CGMMV侵染性克隆的构建
        2.2.2 ZYMV和WMV侵染性克隆的构建
        2.2.3 侵染性克隆的接种
        2.2.4 侵染性的检测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 CGMMV侵染性克隆的构建及其侵染性的检测
        2.3.2 ZYMV和WMV侵染性克隆的构建及其侵染性的检测
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 CGMMV编码蛋白氨基酸位点与致病性关系
    3.1 材料与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 突变体的构建及其侵染性的检测
        3.2.2 PVX表达系统相关载体的构建及其侵染性的检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 复制相关蛋白突变分析
        3.3.2 MP突变分析
        3.3.3 CP突变分析
        3.3.4 CP突变体L25A在各自然寄主中所引起的症状
        3.3.5 不同区域在PVX表达系统中的致病性分析
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 复制相关蛋白第284位氨基酸与CGMMV致病性关系初探
    4.1 材料与试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 CGMMV基因组序列的比对
        4.2.2 复制相关蛋白相关突变体的构建及侵染性的检测
        4.2.3 沉默抑制活性相关检测
    4.3 结果与分析
        4.3.1 pXT1-CGMMV中所含CGMMV基因组序列的分析
        4.3.2 复制相关蛋白aa284的回复突变及其侵染性分析
        4.3.3 复制相关蛋白aa284相关突变分析
        4.3.4 复制相关蛋白其他精氨酸位点致病性检测及回复情况分析
        4.3.5 复制相关蛋白Arg284回复机制初探
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历



本文编号：3839510