豚鼠UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8基因的克

发布时间：2024-01-20 14:15

　　实验动物与人类医学发展息息相关,豚鼠作为实验动物,在人类医学研究中起重要作用,UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8是人类疾病相关的重要基因。本研究以豚鼠实验材料,通过RT-PCR方法克隆了豚鼠的UGT1A1基因(GenBank登录号:KT160222)、UGT1A3基因(GenBank登录号:KT160224)和UGT1A8基因(GenBank登录号:KT160223),并在此基础上,依据生物信息学工具分析了三个基因的核苷酸及氨基酸序列特性。利用实时荧光定量PCR分析,对这三个基因在豚鼠不同组织部位的表达情况进行了分析。主要实验结果如下:1.UDP-葡萄糖醛酸转移酶1家族多肽A1(UDP glucuronosyltransferase 1family,polypeptide A1,UGT1A1)是重要的人类疾病相关基因,本研究采用RT-PCR的方法获得UGT1A1基因cDNA序列全长,该基因开放阅读框全长为1602bp,编码533个氨基酸,该基因编码蛋白与Degu、达马拉鼹鼠、人、北部白颊长臂猿、疣猴、川金丝猴的UGT1A1蛋白分别具有84%、84%、80%、80%、80%、79%...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词
1 前言
    1.1 实验动物与人类医学发展息息相关
    1.2 豚鼠作为实验动物，在医学研究中起重要作用
    1.3 UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8是与人类疾病相关的重要基因
        1.3.1 UGT1A1基因功能研究进展
            1.3.1.1 UGT1A1与黄疸
            1.3.1.2 UGT1A1与Gilbert综合征
            1.3.1.3 UGT1A1与伊立替康
            1.3.1.4 UGT1A1与小细胞肺癌
            1.3.1.5 UGT1A1与结直肠癌
        1.3.2 UGT1A3基因功能研究进展
            1.3.2.1 UGT1A3与糖尿病
            1.3.2.2 UGT1A3与癌症、肿瘤
            1.3.2.3 UGT1A3与黄酮类药物
        1.3.3 UGT1A8基因功能研究进展
            1.3.3.1 UGT1A8与黄酮
            1.3.3.2 UGT1A8与雷洛昔芬
            1.3.3.3 UGT1A8与霉酚酸
            1.3.3.4 UGT1A8与二氢睾酮
    1.4 研究目的及意义
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要药品试剂及试剂盒
    2.2 试验方法
        2.2.1 总RNA的提取与检测
        2.2.2 cDNA第一链合成
        2.2.3 UGT1A1基因的克隆
        2.2.4 UGT1A3基因的克隆
        2.2.5 UGT1A8基因的克隆
        2.2.6 目的片段的回收及测序
        2.2.7 基因的序列分析
        2.2.8 UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8基因表达的荧光定量分析
            2.2.8.1 荧光定量PCR引物
            2.2.8.2 实时荧光定量PCR
            2.2.8.3 荧光定量PCR数据分析
3 结果与分析
    3.1 豚鼠UGT1A1基因的克隆、序列鉴定结果
        3.1.1 豚鼠UGT1A1基因编码区cDNA序列的克隆
        3.1.2 豚鼠UGT1A1基因的生物信息学分析
            3.1.2.1 豚鼠UGT1A1基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.1.2.2 豚鼠UGT1A1蛋白序列的多重比对分析
            3.1.2.3 豚鼠UGT1A1基因进化分析
        3.1.3 豚鼠UGT1A1蛋白的跨膜结构分析
        3.1.4 豚鼠UGT1A1基因结构分析
        3.1.5 豚鼠UGT1A1基因组织表达谱分析
    3.2 豚鼠UGT1A3基因的克隆、序列鉴定结果
        3.2.1 豚鼠UGT1A3基因编码区cDNA序列的克隆
        3.2.2 豚鼠UGT1A3基因的生物信息学分析
            3.2.2.1 豚鼠UGT1A3基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.2.2.2 豚鼠UGT1A3蛋白序列的多重比对分析
            3.2.2.3 豚鼠UGT1A3基因进化分析
        3.2.3 豚鼠UGT1A3蛋白的跨膜结构分析
        3.2.4 豚鼠UGT1A3基因结构分析
        3.2.5 豚鼠UGT1A3基因组织表达谱分析
    3.3 豚鼠UGT1A8基因的克隆、序列鉴定结果
        3.3.1 豚鼠UGT1A8基因编码区cDNA序列的克隆
        3.3.2 豚鼠UGT1A8基因的生物信息学分析
            3.3.2.1 豚鼠UGT1A8基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.3.2.2 豚鼠UGT1A8蛋白序列的多重比对分析
            3.3.2.3 豚鼠UGT1A8基因进化分析
        3.3.3 豚鼠UGT1A8蛋白的跨膜结构分析
        3.3.4 豚鼠UGT1A8基因组织表达谱分析
4 讨论
    4.1 保证总RNA质量，防止降解
    4.2 豚鼠UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8基因编码区克隆策略
    4.3 豚鼠UGT1A1基因的克隆对人类相关疾病研究的价值
    4.4 豚鼠UGT1A3基因的克隆对人类相关疾病研究的价值
    4.5 豚鼠UGT1A8基因的克隆对人类相关疾病研究的价值
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3880991