水稻条纹病毒p3蛋白与寄主因子间的互作

发布时间：2024-02-01 11:48

　　水稻条纹叶枯病曾在我国多次爆发流行,给我国的水稻生产造成了极其惨重的损失。该病害由水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起,其编码的p3蛋白是一个RNA沉默抑制子,在RSV致病过程中起关键作用。为解析p3的致病机制,本研究通过酵母双杂交实验在水稻中筛选得到2个候选的p3靶标蛋白,分别为水稻WRKY40转录因子(WRKY transcription factor 40,OsWRKY40)和水稻脂类相关质体蛋白(Plastid lipid-associated protein 2,OsPAP2),并获得了靶标蛋白基因的全长。同时,本研究在本氏烟中克隆得到OsPAP2与OsWRKY40的同源基因,即NbPAP与NbWRKY40。进一步利用酵母杂交实验、Pull-down和双分子荧光互补实验(BiFC)证实了OsPAP2、NbPAP、OsWRKY40、NbWRKY40在体内外均与p3互作。亚细胞定位研究显示:OsPAP2和NbPAP蛋白主要定位于叶绿体上,OsWRKY40和NbWRKY40蛋白特异性地分布于细胞核中,p3蛋白单独表达时定位于细胞质和细胞核中。但在BiFC实...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1候选阳性克隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal平板上的显色检测Fig2.1AnalysisoftheputativepositiveclonesontheSD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-ɑ-Galplat

隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-GautativepositiveclonesontheSD/-Leu/-T段的鉴定及同源性分析/-His/-Ade/X-α-Gal营养缺陷型培/-Leu/-Trp液体培养基中，振荡培养DNA文库的通用引....

图2.2部分候选阳性克隆的酵母菌落PCR检测1-5，阳性克隆的PCR产物；M，DNA分子量标准

图2.1候选阳性克隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal平板上的显色检测Fig2.1AnalysisoftheputativepositiveclonesontheSD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-ɑ-Gal....

图2.3水稻中2个目的基因的PCR扩增结果

PCR扩增的特异引物，以水稻幼苗叶片cDNA为模板PCR扩增2个寄主因子的全长基因。琼脂糖凝胶电泳结果显示OsWRKY40和OsPAP2基因PCR扩增片段的大小均与预期结果相一致（图2.3）。将PCR产物分别克隆到克隆T载体上进行测序验证。返还的测序结果表明，重组克隆质粒中插入目....

图2.5基于不同PAP蛋白氨基酸序列的系统进化树

图2.5基于不同PAP蛋白氨基酸序列的系统进化树Fig.2.5PhylogenetictreeofPAPfromdifferentplantspeciesOsWRKY40基因编码蛋白同源性及其进化分析OsWRKY40进行保守功能域分析显示,该蛋白....

本文编号：3892066