RNAi技术在棉蚜性母形成过程中的应用

发布时间：2024-02-15 13:32

　　棉蚜(Aphis gossypii Glover),是重要的农林害虫,可以响应光周期的变化进行孤雌生殖和有性生殖,此为生殖型多型现象;同时其还具有翅多型现象。棉蚜生殖型转变受到人们的普遍关注而背后分子机制一直不得而知。RNAi技术自发现以来就成为研究基因功能的重要工具,广泛应用于蜜蜂(Apoidea)、蟋蟀(Gryllidae)、果蝇(Drosophila melanogaster)、豌豆蚜(Acyrthosiphum pisim)等多种模式生物的研究中,但不同物种间RNAi干扰效率差异较大。前期,我们采用饲喂和注射法对棉蚜RNAi进行了较为系统的研究,同时我们也获得了性母诱导产生的必备条件,这些为开展棉蚜性母形成分子机制的研究奠定了基础。胰岛素信号通路参与调控多种昆虫的多型现象,如褐飞虱(Nilaparvata lugens)的长翅短翅、蜜蜂的工蜂蜂王分化。作为调控生物生长发育、代谢、生殖以及衰老等生理过程的重要激素,其在棉蚜生殖型转变中的作用机制仍不明了。本实验以棉蚜为研究对象,选用胰岛素信号通路中的关键基因进行RNA干扰,通过检测干扰效率、观察表型以阐述胰岛素信号通路各基因对棉蚜...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
一 引言
    1.1 棉蚜
        1.1.1 棉蚜生活史简介
        1.1.2 生殖可塑性
        1.1.3 翅型的分化
    1.2 胰岛素
        1.2.1 胰岛素简介
        1.2.2 胰岛素信号通路
        1.2.3 昆虫中胰岛素信号通路的研究
    1.3 RNAi
        1.3.1 RNAi的机理
        1.3.2 RNAi在生物学方面的功能
        1.3.3 RNAi在昆虫方面的研究
    1.4 研究意义
二 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 PCR克隆并测序验证基因扩增片段?
        2.2.2 LB溶液和LB平板的配制
        2.2.3 连接及转化：（pGM-T克隆试剂盒）
        2.2.4 dsRNA合成
        2.2.5 cDNA的制备及qRT-PCR
        2.2.6 棉蚜虫体、卵巢观察
        2.2.7 注射的方法
        2.2.8 壳聚糖包埋dsRNA方法
        2.2.9 实验流程
三 实验结果
    3.1 棉蚜中注射胰岛素受体在G2中检测干扰效率
    3.2 干扰InR1，PI3K，Akt和Foxo对棉蚜G1发育的影响
四 讨论
    4.1 干扰胰岛素信号通路中基因对棉蚜G2的影响
    4.2 干扰胰岛素信号通路中基因对棉蚜G1的影响
五 结论
符号说明
参考文献
致谢



本文编号：3899827