南方根结线虫生防菌的筛

发布时间：2025-01-10 20:42

　　南方根结线虫是一种危害作物生长的植物寄生性线虫,会在作物的根部形成大量根结,阻碍植物根部对营养物质的吸收,甚至会严重破坏植物根部而导致植物死亡。据报道,全世界范围内,每年由线虫造成的损失,超过1250亿美元,其中绝大多数是由于根结线虫造成的。化学农药的使用对环境和人体健康造成的危害越来越严重,对化学农药的使用限制也越来越严格。使用生物农药并配合其它方法来防治包括根结线虫在内的农业病害,有着十分重要的意义。寻找合适的微生物资源,开发利用生物农药进行生物防治,无疑具有远大的前景。本研究分离筛选了一系列对南方根结线虫具有一定生防作用的菌株,并对其生防效果进行了研究,以期为开发新的植物寄生性线虫生防菌剂提供新的菌种资源。主要研究结果如下:(1)杀线虫菌株的筛选。通过菌株发酵液触杀和挥发性气体抑制两种作用方式来筛选防治根结线虫的菌株。发酵液触杀试验从分离获得的23株细菌和22株放线菌中筛选出E5和E9两株对南方根结线虫防效突出的细菌。这两株细菌在用LB培养基37℃恒温振荡培养48h后,其发酵液处理南方根结线虫二龄幼虫(J2)12h,对线虫幼虫的的校正致死率均达到90%以上。通过挥发性气体抑制试验,...

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 根结线虫的分类
    1.2 根结线虫的危害
    1.3 根结线虫生物防治方法
        1.3.1 生物防治的一般定义
        1.3.2 真菌作为BCA防治根结线虫
            1.3.2.1 捕食性真菌
            1.3.2.2 卵寄生真菌
            1.3.2.3 具有黏性孢子的食线虫真菌
            1.3.2.4 丛枝菌根内生真菌
            1.3.2.5 微生物毒素
            1.3.2.6 拮抗根结线虫的放线菌
            1.3.2.7 拮抗根结线虫的细菌
            1.3.2.8 其它生物体
    1.4 生物防治药剂的主要审批机构
        1.4.1 美国国家环境保护局(EPA)
        1.4.2 法国农业部和渔业部
        1.4.3 有机物质评估研究所(OMRI)
    1.5 生防药剂市场
        1.5.1 市场上的主要的防治根结线虫的真菌产品
            1.5.1.1 BIO-ACT?/MELOCONWG
            1.5.1.2 BOTANIGARD?;MYCOTROL?
            1.5.1.3 BIOSTAT?
            1.5.1.4 MYCOTAL?
            1.5.1.5 TRIANUM?
            1.5.1.6 MET52?
            1.5.1.7 NEMAXXIONBIOL?
            1.5.1.8 REMG?
        1.5.2 流体态发酵产品
        1.5.3 固态发酵产品
        1.5.4 生防药剂的配方
    1.6 本研究的目的和意义
    1.7 研究内容
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 用于分菌的试验样品
        2.1.2 靶标线虫
        2.1.3 培养基
        2.1.4 线虫染色材料
        2.1.5 主要试剂
    2.2 主要仪器
    2.3 试验方法
        2.3.1 样品分菌
            2.3.1.1 芽孢菌的筛选
            2.3.1.2 放线菌的筛选
        2.3.2 土壤灭菌及番茄育苗
        2.3.3 南方根结线虫二龄幼虫和根结线虫虫卵的获得
        2.3.4 细菌发酵液的制备
        2.3.5 放线菌发酵液的制备
        2.3.6 杀线虫菌株触杀初筛
        2.3.7 杀线虫菌株挥发性气体(VOC)抑制线虫试验
        2.3.8 发酵液对线虫侵染活性的影响
            2.3.8.1 根结线虫的处理
            2.3.8.2 番茄植株的处理
            2.3.8.3 番茄根部的染色
        2.3.9 生防细菌发酵液对线虫胚胎发育影响
        2.3.10 生防细菌发酵上清液对南方根结线虫二龄幼虫活性的影响
        2.3.11 生防细菌的盆栽验证试验
            2.3.11.1 灭菌土壤、番茄幼苗及二龄幼虫悬液的准备
            2.3.11.2 发酵液的制备
            2.3.11.3 试验设计
            2.3.11.4 土壤虫口密度统计方法
            2.3.11.5 生防菌对南方根结线虫防效的评定方法
        2.3.12 生防细菌对根结线虫致死率及盆栽试验结果的数据分析
        2.3.13 根结线虫生防细菌的形态学鉴定
        2.3.14 三株根结线虫生防细菌的生理生化试验
        2.3.15 三株根结线虫生防细菌的分子生物学鉴定
            2.3.15.1 基因组DNA的提取
            2.3.15.2 目的片段的扩增
3 结果与分析
    3.1 从试验样品中初步分离生防菌株
    3.2 南方根结线虫的活性验证
    3.3 使用菌株发酵液对南方根结线虫的触杀试验
        3.3.1 细菌发酵液对南方根结线虫幼虫的致死率
        3.3.2 放线菌发酵液对南方根结线虫幼虫的致死率
    3.4 杀线虫菌株挥发性气体(VOC)抑制南方根结线虫幼虫试验
        3.4.1 细菌挥发性气体抑制南方根结线虫幼虫试验
        3.4.2 放线菌挥发性气体抑制线虫试验
    3.5 生防菌株发酵液对根结线虫侵染活性的影响
    3.6 生防细菌发酵液对根结线虫胚胎发育的影响
        3.6.1 南方根结线虫胚胎发育的过程
        3.6.2 生防细菌发酵液处理卵囊后对线虫胚胎发育的影响
        3.6.3 电子显微镜观察生防细菌发酵液处理卵囊后虫卵卵壳特征
    3.7 生防细菌发酵上清液对南方根结线虫二龄幼虫的杀虫效果
        3.7.1 生防细菌发酵上清液对南方根结线虫二龄幼虫(J2)的致死率
        3.7.2 生防细菌发酵上清液在不同振荡培养时间对南方根结线虫二龄幼虫的致死率
    3.8 生防细菌发酵液防治南方根结线虫盆栽试验
        3.8.1 生防细菌发酵液灌根对南方根结线虫防治效果的盆栽试验
        3.8.2 生防细菌发酵液处理含有南方根结线虫虫土试验
    3.9 杀线虫生防细菌的鉴定
        3.9.1 三株生防细菌的形态学鉴定
        3.9.2 三株生防细菌的生理生化试验
        3.9.3 三株生防细菌的16SrDNA分子鉴定
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：4025420