稻瘟病菌中一个含Zn 2 Cys 6 锌指蛋白的基因簇的功能探索

发布时间：2025-02-08 17:25

　　稻瘟病是由稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）侵染水稻引起的真菌性病害,稻瘟病的发生严重威胁了水稻的产量和品质,造成了严重的损失。稻瘟病菌的侵染过程和致病机理在丝状真菌中具有典型特征,稻瘟病菌已经成为病原真菌与寄主植物相互作用机理研究的重要模式生物。研究稻瘟病菌侵染相关的功能基因,对解析植物病原真菌的致病机理和稻瘟病的防治都具有重要意义。基因组中,两个或多个功能上紧密联系的基因,聚集在一起成簇出现,相互协作共同参与调节同一个代谢或发育途径,称为一个基因簇。基因簇是原核生物基因组的一个常见现象和重要特征,如植物病原细菌中的“致病岛”等。丝状真菌中基因簇的发掘和功能研究相对较少,已报道的有粗糙脉胞菌和构巢曲霉中调节奎尼酸代谢（qa gene cluster）和黑色素合成的基因簇等。至目前,植物病原真菌中,基因簇的功能研究鲜有报道,基因簇在病菌致病过程中的作用我们知之甚少。为了进一步了解真菌中的基因簇,揭示基因簇对植物病原菌侵染过程的生物学作用,我们对稻瘟病菌中一个可能的基因簇的功能进行了探索。稻瘟病菌假想蛋白 MGG₁0528,MGG₁...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文献综述 稻瘟病菌功能基因研究进展
    1 稻瘟病菌
        1.1 稻瘟病菌研究概况
        1.2 稻瘟病菌的侵染循环
        1.3 稻瘟病菌致病相关基因
            1.3.1 外界信号识别的相关基因
            1.3.2 与产孢相关基因
            1.3.3 附着胞分化相关基因
            1.3.4 黑色素形成积累的相关基因
            1.3.5 甘油合成的相关基因
            1.3.6 参与侵入和侵入后扩展的相关基因
    2 真菌基因簇
        2.1 调节奎尼酸代谢的基因簇
        2.2 调节乙醇代谢的基因簇
        2.3 调节脯氨酸代谢的基因簇
    3 稻瘟病菌中一个可能的基因簇
        3.1 相关基因研究概况
            3.1.1 Zn₂Cys₆锌指蛋白
            3.1.2 糖转运蛋白
            3.1.3 NLP蛋白家族
    4 本研究的目的及意义
下篇 研究内容
    1 材料与方法
        1.1 供试菌株及培养条件
        1.2 培养基
        1.3 基因序列分析
        1.4 聚合酶链反应(PCR)
            1.4.1 常规PCR
            1.4.2 实时荧光定量PCR
        1.5 基因敲除
            1.5.1 基因敲除载体的构建及真菌转化
            1.5.2 转化子的筛选及验证
            1.5.3 突变体菌株单孢分离
        1.6 稻瘟病菌DNA的提取
            1.6.1 玻璃珠法(用于转化子的PCR验证)
            1.6.2 CTAB法
        1.7 蛋白定位载体构建
        1.8 突变体表型分析
            1.8.1 生长速度及菌落形态
            1.8.2 对不同碳源利用能力测定
            1.8.3 对活性氧的耐受性及细胞壁完整性测定
            1.8.4 有性生殖
            1.8.5 致病性测定
    2 结果分析
        2.1 基因序列分析
        2.2 MGG₁0528和MGG₁0529的亚细胞定位
        2.3 基因敲除
        2.4 基因的时空表达动态
        2.5 表型分析
            2.5.1 菌落形态及生长速度
            2.5.2 致病性检测
            2.5.3 对活性氧的耐受性
            2.5.4 细胞壁强度测定
            2.5.5 对不同碳源的利用能力
            2.5.6 有性生殖
    3 小节和讨论
参考文献
附录1 培养基配方
附录2 缓冲液配方
附录3 大肠杆菌转化
附录4 胶回收(DNA片段)
附录5 小剂量DNA质粒的提取
附录6 农杆菌感受态的制备与转化
附录7 稻瘟病菌AtMT转化
附录8 缩略词
致谢



本文编号：4031713