基于PCR技术的木材腐朽菌快速鉴定方法的研究

发布时间：2022-12-18 00:32

　　近年来,我国的森林资源面临着严重的短缺问题,木材的供需矛盾日益尖锐。如何合理的利用和节省木材资源,是一个急需解决的问题,保证木材优越的质量显得尤为重要。在影响木材质量的众多因素中,由木材腐朽菌侵染木材而引起的木材腐朽现象十分常见。木材腐朽每年造成大量的木材资源流失,降低了木材的质量,严重影响木材的使用。为保护木材资源和合理地使用木材,人们对木材腐朽及木材腐朽菌作了广泛而深入的研究。目前鉴定木材腐朽菌的方法主要有两种,一种是传统的形态学鉴定方法,即通过观察菌落的宏观培养特性和微观培养特性的特征来对菌种进行鉴定和分类；另一种是近年来发展起来的分子水平的鉴定方法,即利用PCR技术快速鉴定出木材腐朽的病原菌。本文首先通过大量实验分别摸索出最适宜木材腐朽菌A、B生长的最适温度、pH值、光照强度、液体培养时摇晃转速。之后通过形态学鉴定方法,观察并记录两种木材腐朽菌菌落的生长率、菌落形状、菌落质地、菌落颜色、培养基的颜色变化以及菌落边缘菌丝的特征、培养基中主要菌丝的类型、产孢情况等,用传统的方法对两种木材腐朽菌进行鉴定,鉴别出了木材腐朽菌A为担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、栓菌属的真菌,木材腐朽菌B属... 

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 研究的背景和意义
        1.1.1 木材腐朽的研究背景和意义
        1.1.2 木材腐朽菌菌种鉴定的研究背景和意义
    1.2 常见木材腐朽菌的分类
        1.2.1 白腐菌
        1.2.2 褐腐菌
    1.3 木材腐朽菌的菌种鉴定方法
        1.3.1 木材腐朽菌的形态学鉴定方法概述
        1.3.2 基于PCR技术的木材腐朽菌分子生物学鉴定方法概述
    1.4 国内外研究现状
    1.5 本文的主要研究内容
2 木材腐朽菌培养条件的优化
    2.1 两种木材腐朽菌菌种的分离
    2.2 两种木材腐朽菌培养条件的优化
        2.2.1 固体培养时培养条件的优化
        2.2.2 液体培养时培养条件的优化
    2.3 本章小结
3 木材腐朽菌的形态学鉴定
    3.1 真菌常用形态学鉴定方法
    3.2 两种木材腐朽菌培养特性的研究
        3.2.1 菌落培养特性的研究
        3.2.2 菌丝培养特性的研究
        3.2.3 通过传统方法鉴定两种木材腐朽菌
    3.3 本章小结
4 PCR技术进行木材腐朽菌鉴定时引物的设计
    4.1 PCR技术的原理
    4.2 PCR技术的分类及研究现状
        4.2.1 巢式PCR
        4.2.2 实时荧光定量PCR
        4.2.3 多重PCR技术
    4.3 PCR反应在木材腐朽菌鉴定中的应用
    4.4 ITS序列分析在木材腐朽菌菌种鉴定上的应用方法
        4.4.1 以ITS区段的分子量为参考进行分子鉴定
        4.4.2 以ITS区段的RFLP图谱作为标记特征进行分子鉴定
        4.4.3 设计专一性探针进行分子杂交的鉴定方法
        4.4.4 用特异性引物扩增ITS区段
    4.5 木材腐朽菌PCR鉴定的引物选取
    4.6 本章小结
5 基于PCR技术的木材腐朽菌快速鉴定
    5.1 两种木材腐朽菌DNA的提取与纯化
    5.2 两种木材腐朽菌DNA纯度的检测
    5.3 PCR扩增
        5.3.1 PCR反应参数的优化
            5.3.1.1 最适反应循环数的选择
            5.3.1.2 热启动与冷启动的选择
        5.3.2 两种木材腐朽菌的PCR扩增
        5.3.3 琼脂糖凝胶电泳反应
    5.4 PCR扩增产物的回收与测序
        5.4.1 扩增产物的回收与纯化
        5.4.2 DNA测序
    5.5 BLAST比对
        5.5.1 木材腐朽菌A的分子鉴定
        5.5.2 木材腐朽菌B的分子鉴定
    5.6 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于ITS区序列的疑似野生“南华”草菇菌株的分子鉴定[J]. 刘主,蔡爱群,刘静华,何智丹,孟晓东.  北方园艺. 2016(01)
[2]乌翅真鲨弗氏柠檬酸杆菌的分离与鉴定[J]. 卢君辉,孙佳佳,董世龙,任硕.  海洋湖沼通报. 2015(04)
[3]长白山野生白耙齿菌菌株ITS序列鉴定及其人工驯化栽培试验[J]. 于萍,隋飞飞,陈艳秋.  中国食用菌. 2015(06)
[4]毛木耳周年化栽培技术[J]. 宋泰良,黄亦英,曾国荣,赖文双.  食用菌. 2014(06)
[5]我国第八次森林资源清查结果及分析[J]. 徐济德.  林业经济. 2014(03)
[6]普氏野马物种的PCR鉴定[J]. 郑小龙,王群,岳志芹,朱来华,梁成珠,邓明俊,肖西志,姜帆,于业锋.  动物医学进展. 2013(11)
[7]离褶伞属分类学研究概况[J]. 汪小庆,周德群,张小雷,李树红.  中国食用菌. 2013(01)
[8]利用PCR-RFLP技术对鲫鱼6个不同品系的鉴定[J]. 庄怡,刘必谦,唐杰.  生物技术通报. 2012(11)
[9]采用种间特异性PCR对海参产品的物种鉴定研究[J]. 文菁,胡超群,张吕平,范嗣刚.  水产科学. 2011(12)
[10]木材腐朽检测及防治的研究进展[J]. 王立海,孙天用.  黑龙江大学工程学报. 2011(02)

硕士论文
[1]黄曲霉拮抗菌分离鉴定、培养条件优化及其发酵上清液部分特性初步研究[D]. 涂彩虹.四川农业大学 2011
[2]野生食用菌菌种分离与鉴定[D]. 李玉.福建农林大学 2008
[3]灵芝菌种的分离鉴定及其几种活性产物的初步研究[D]. 董元荣.南京师范大学 2006



本文编号：3720964