OsARP1生长素抑制蛋白基因对水稻种子萌发和幼苗生长的影响

发布时间：2023-09-13 22:43

　　生长素抑制蛋白基因(Auxin repressed protein gene,ARP)受到生长素(IAA)信号抑制表达,在植物的生长、发育、抗病、抗逆以及种子休眠等过程中发挥重要的作用。但有关水稻生长素抑制基因OsARP1的研究,目前还没见报道。本文采用基因过表达和CRISPR/Cas9基因敲除转基因技术,创建水稻OsARP1基因过表达及其启动子和外显子敲除转基因植株,研究这些转基因植株在种子萌发和幼苗生长等方面的差异,获得了如下结果:1、获得了OsARP1过量表达载体转化再生植株191株,对其中60株进行阳性检测发现了转基因阳性植株56株,阳性率为93.33%。采用qRT-PCR方法对56株T₀代转基因阳性植株OsARP1基因的表达量进行分析,发现表达量高于野生型2倍以上的有27株,占阳性植株总数的48%。2、获得了OsARP1启动子敲除载体转化再生植株112株,对其中47株进行阳性检测发现了转基因阳性植株44株,阳性率为93.62%。对44株阳性植株靶点序列进行分析,发现31株靶点序列发生了变异,变异率为70.45%;在靶点1发生变异的植株28株,纯合变异13...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 生长素的研究进展
        1.1.1 生长素的发现及其作用
        1.1.2 生长素合成与代谢相关基因的研究进展
    1.2 植物生长素抑制蛋白基因的研究进展
    1.3 基因编辑技术的研究进展
    1.4 本研究的主要内容,目的及意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料与种植
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 材料种植与取样
    2.2 实验方法
        2.2.1 OsARP1 过表达载体的构建
        2.2.2 水稻OsARP1 基因的CRISPR/Cas9 敲除载体的构建
        2.2.3 OsARP1 过表达载体及其敲除载体的遗传转化
        2.2.4 水稻基因组DNA的提取
        2.2.5 水稻总RNA的提取
        2.2.6 RNA的反转录
        2.2.7 转基因阳性水稻植株的检测
        2.2.8 转基因敲除植株的测序分析
        2.2.9 qRT-PCR检测转基因植株的表达量
        2.2.10 转基因水稻植株的生长表型分析
        2.2.11 数据统计与分析
第三章 结果与分析
    3.1 OsARP1 基因过表达和敲除载体的构建
        3.1.1 OsARP1 过表达载体的构建
        3.1.2 OsARP1 启动子上敲除载体构建
        3.1.3 OsARP1 外显子上敲除载体的构建
    3.2 T₀代OsARP1 转基因植株的获得
        3.2.1 T₀代OsARP1 过表达转基因植株的获得
        3.2.2 T₀代OsARP1 启动子敲除转基因植株的获得
        3.2.3 T₀代OsARP1 外显子敲除转基因植株的获得
    3.3 T₀代OsARP1 过表达和敲除转基因植株的分子鉴定
        3.3.1 T₀代OsARP1 过表达植株的表达量分析
        3.3.2 OsARP1 启动子敲除转基因植株的分子鉴定
        3.3.3 OsARP1 外显子敲除转基因植株的分子鉴定
    3.4 OsARP1 转基因植株的表型分析
        3.4.1 OsARP1 基因对种子萌发的影响
        3.4.2 OsARP1 基因对幼苗株高影响
第四章 讨论
    4.1 CRISPR-Cas技术是一种有效的基因编辑方法
    4.2 生长素抑制蛋白基因ARP的功能分析
    4.3 本研究的不足和展望
致谢
参考文献
附录



本文编号：3846054