AfphyA(b)基因在大豆中的功能验证及Thpht1基因家族的生物信息学分析

发布时间：2024-11-02 11:16

　　磷是参与植物生理及生长过程中重要的营养元素,但磷在土壤中的可移动性差,因吸附作用很难被吸收利用,因此增强作物对磷素吸收、转运的能力,提高对磷素的吸收效率,已成为大豆育种工作的研究重点。本研究以大豆密码子的使用偏好性为依据,对无花果曲霉植酸酶phy A基因进行密码子优化,人工合成了适合在大豆中表达的phyA（b）基因。以pCAMBIA3301为骨架,构建由大豆凝集素基因启动子和信号肽序列调控的植物表达载体pCBPS-phyA（b）。用农杆菌介导法遗传转化吉林35,经聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）检测、bar试纸条检测、除草剂叶片涂抹检测及半定量PCR（Reverse-Transcription PCR,RT-PCR）分析,结果表明目的基因整合至大豆基因组中并可以正常表达。依据RT-PCR结果,选取外源基因表达量最高的T₃代的株系,进行磷性状的相关分析,结果表明,phyA（b）超表达株系在植酸酶活性、植酸磷含量、无机磷含量方面均优于phyA超表达株系以及野生型对照。由上述结果可知,phyA（b）基因比未改造的phyA基因在大...

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pCBPS-phyA和pCBPS-phyA(b)，筛选标记为草胺膦乙酰转移酶基因(Phosphinothricinacetyltransferase，bar)如图2-1所示。图2-1克隆载体pMD19-Le3PS和植物表达载体pCBP....

豆密码子使用频率（黑色）和无花果曲霉phyA基因密码子使用频Comparisonofcodonusagefrequencyofsoybean(black)andthatofphAspergillusficuum(red)基因进行了重新设计，密码子自....

图2-3菌落PCR检测DH5α阳性克隆3DetectionofDH5αreactionpositivecloneswithcolonyPCR的转pCBPS-phyA单菌落；d-e：为挑选的转pCBPS-phyA(b)单+：阳性对照质粒；-：阴性....

图2-4菌落PCR检测C58阳性克隆ig.2-4DetectionofC58reactionpositivecloneswithcolonyPCR-e：为挑选的单菌落，+：阳性对照质粒，-：阴性对照H2O。

本文编号：4009507