俄罗斯鲟性腺溃烂病的免疫效果研究及脓包病病原的分离鉴定

发布时间：2020-04-25 07:23

【摘要】：本论文共分三部分:第一部分将引起俄罗斯鲟性腺溃烂病的两种致病菌嗜水气单胞菌与鲁氏耶尔森菌制备成二联灭活疫苗,探讨其对受免俄罗斯鲟的免疫效果,为以后生产实践中疫苗的开发打下基础;第二部分在俄罗斯鲟基础饲料中添加免疫多糖---壳聚糖,研究其对俄罗斯鲟生长性能与免疫功能的影响;第三部分针对养殖场突发疾病脓包病,找到其致病因子,从分子生物学的角度鉴定它为温和气单胞菌,并对其做了药物敏感性试验,丰富了鲟疾病理论知识,对生产实践也有一定的借鉴作用。1 嗜水气单胞菌与鲁氏耶尔森菌二联灭活疫苗对俄罗斯鲟的免疫效果研究用嗜水气单胞菌与鲁氏耶尔森菌制成二联灭活疫苗,以腹腔注射的方式免疫俄罗斯鲟后,通过检测免疫俄罗斯鲟血清超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性、补体C3含量、IgM含量、抗体效价及对嗜水气单胞菌、鲁氏耶尔森菌攻毒的免疫保护率,评价该二联灭活疫苗对俄罗斯鲟的免疫保护效果。结果显示,二联灭活疫苗免疫俄罗斯鲟后,血清超氧化物歧化酶活力、溶菌酶活力、补体C3含量及IgM含量相比对照组都有不同程度的升高,且添加佐剂的二联灭活疫苗免疫效果更强。二联灭活疫苗诱导的抗体效价在一免后的第2周达到峰值,随后有所下降,加强免疫后抗体效价在第5周再次达到峰值,且添加佐剂的二联灭活疫苗组诱导的抗体效价高于未添加佐剂的二联灭活疫苗组,而空白对照组在整个试验期间对两种菌的抗体效价一直小于4。免疫56天后,分别用两种病原菌攻毒,佐剂二联灭活疫苗对嗜水气单胞菌与鲁氏耶尔森菌的免疫保护率分别为61.54%、60.71%,与无佐剂组相比,分别提高7.69%、7.14%。试验结果表明,该二联灭活疫苗对引起俄罗斯鲟性腺溃烂病的两种细菌可起到一定的预防效果。2 壳聚糖对俄罗斯鲟生长性能及免疫功能的影响在基础饲料中分别添加浓度为0(对照组)、1.25、2.5、5、7.5、10 g/kg的壳聚糖,投喂12 g左右的俄罗斯鲟50d,每组设3个重复,每个重复30尾,研究不同浓度的壳聚糖对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)幼鱼的生长性能及免疫力的影响。结果表明,相比对照组,添加2.5 g/kg、5 g/kg的壳聚糖可显著降低饲料系数、提高俄罗斯鲟幼鱼的增重率和特定生长率,(P0.05),而当添加量超过10 g/kg时会抑制其生长(P0.05);1.25 g/kg组与2.5 g/kg组血清超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(P0.05),其它试验组则显著低于对照组(P0.05);2.5 g/kg与5 g/kg组溶菌酶活性显著高于对照组,当壳聚糖添加量超过7.5 g/kg时则会抑制血清溶菌酶活性(P0.05);1.25 g/kg~5 g/kg组酸性磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性和补体C3含量都显著高于对照组(P0.05);各试验组IgM含量不受壳聚糖含量的影响,与对照组差异不显著(P0.05)。在本试验条件下,添加适量的壳聚糖能提高俄罗斯鲟幼鱼的生长性能,增强其免疫能力,综合评价增重率、特定生长率及非特异性免疫等指标,壳聚糖添加量以2.5 g/kg为宜。3 鲟脓包病病原的分离鉴定及药敏试验从濒死的鲟鱼身上分离到3株优势菌株,命名为BX0814、BX0815、BX0816,回归感染健康试验鲟,发现BX0815有致病性,且试验鲟发病症状与自然发病鲟症状相似,并从试验鲟体内再次分离到此菌,说明BX0815为致病菌。通过对此致病菌的形态学、生理生化特征、分子生物学以及药敏特性分析,结果显示BX0815为革兰氏阴性菌,其16S r DNA的序列与温和气单胞菌(GenBank登录号:FJ461353.1)的同源性高达100%;经系统发育进化树分析发现,BX0815菌株与温和气单胞菌FJ461353.1自然聚类为一支,进一步表明BX0815菌株为温和气单胞菌。药敏特性试验结果显示,诺氟沙星、庆大霉素、氟苯尼考等15种药物对菌株BX0815有很好的抑菌效果。由试验结果分析可知,引起鲟鱼患脓包病症的病原是温和气单胞菌,病原菌的鉴定及其药敏试验结果为鲟鱼养殖过程中,合理选择药物防治疾病提供了理论依据。
【图文】：

小写字母,大写字母,血清,活力

图 1-1 血清中超氧化物歧化酶的活力Fig. 1-1 Activity of SOD in serum注：相同时间，，肩注不同小写字母表示差异显著（P<0.05)，肩注不同大写字母表示差异极著（P<0.01)，肩注相同表示差异不显著（P>0.05)，下同。Note: In the same time, different small letters superscripts means significant difference (P<0.0

溶菌酶,血清,活力

图 1-2 血清中溶菌酶的活力Fig.1- 2 Activity of lysozyme in serum2.3 血清补体 C3 的含量从图 1-3 看出，在免疫不同时间后，免疫组的俄罗斯鲟血清补体 C3 含量均有
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S943

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