文蛤不同群体的亲缘关系分析及鲜味物质比较

发布时间：2020-04-28 04:18

【摘要】：文蛤(Meretrix meretrix)的养殖历史已有千年之久,其经济价值高、营养丰富、肉质鲜美,是我国重要的海产经济贝类之一。近年来由于文蛤自然苗种被大量采捕,异地移养,人为加大了具有不同遗传背景的文蛤群体间的基因交流,对我国文蛤种质资源保护产生了较大的负面影响,因此,本文采用三种分子生物学方法对6个不同海域文蛤地理群体的亲缘关系进行分析。另外,对江苏2种壳色文蛤及红壳色选育子代的主要鲜味物质进行定量检测,为文蛤良种选育提供参考。为探究中国辽东半岛海域(辽宁群体)、长江口及其两翼海域(江苏群体)、台湾海峡西部海域(福建群体)、珠江口及其两翼海域(广东群体)、北部湾海域(广西群体)以及日本伊势湾海域(三重群体)6个不同海域文蛤地理群体的亲缘关系,采用18S rRNA基因、线粒体细胞色素氧化酶c亚基I(COI)及16S rRNA基因3种分子标记进行序列测定与分析。测序结果显示,3种基因序列长度分别在1854、658、596 bp左右;18S rRNA基因碱基组成无偏异,序列较为保守;COI与16S rRNA基因A+T平均含量明显大于G+C含量,符合线粒体基因组成特征。通过MegAlign软件比对6个地理群体文蛤,序列相似百分比分别为99.7%~100.0%(18S)、91.7%~99.8%(COI)、90.2%~99.8%(16S),其中三重文蛤序列差异最大;以文蛤属的帘文蛤(Meretrix lyrata)作外群,采用MEGA 5.03软件中相邻连接法(NJ)构建系统发育树显示,我国沿海5个文蛤群体聚为一枝且与日本三重文蛤分开,自展值分别为67%(18S)、99%(COI)、98%(16S);我国沿海5个文蛤群体中,辽宁、江苏、福建文蛤首先聚在一起,其次是广西文蛤,最后是广东文蛤。研究结果表明,辽宁、江苏、福建文蛤同源性较高,亲缘关系最近;广西文蛤、广东文蛤与我国其它文蛤群体间遗传差异较大,地理遗传分化明显;而日本三重文蛤与我国沿海文蛤可定为文蛤的2个地理亚种。以江苏文蛤为研究对象,采集红壳色文蛤原种、黄壳色文蛤原种、红壳色文蛤选育F1、红壳色文蛤选育F2 4个群体,检测其主要非挥发性鲜味物质成分单磷酸腺苷(AMP)、单磷酸鸟苷(GMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)、琥珀酸、游离氨基酸、无机离子(Na+、K+、Cl-、PO43-)的含量,并通过味道强度值(TAV)评价其呈味作用。鉴于核苷酸与氨基酸在呈味方面的协同效应,采用味精当量(EUC)评价不同文蛤群体的鲜味品质。结果表明,文蛤软体组织中AMP、琥珀酸、谷氨酸、精氨酸、丙氨酸、Na+、K+、Cl-的TAV值大于1,是文蛤鲜味的主要贡献者;红壳色文蛤原种的鲜味强度最大(4.92 g·100g-1),其子代红壳色文蛤F1(4.08 g·100g-1)、红壳色文蛤F2(4.09 g·100g-1)稍有降低,但仍显著高于黄壳色文蛤原种(3.34 g·100g-1)(P0.05),表明江苏红壳色文蛤在鲜味品质方面具有相对稳定的较高品质。文章为文蛤良种选育及文蛤在调味产品开发方面的应用提供了理论依据。
【图文】：

地理分布图,样本采集,采样地点

图 2-1 样本采集地理分布图（▲代表采样地点）Fig.2-1 Geographic distribution of sampling sites (▲shows a sampling site)2.1.2 仪器设备超纯水系统：美国 milipore，ELIX-5Academic低温冰箱：海尔集团电热式压力蒸汽灭菌器：浙江新丰医疗器械有限公司，XFS-30CA微量移液器：德国 Eppendorf公司水浴锅：上海慧泰仪器制造有限公司高速冷冻离心机：德国艾本德股份公司PCR 仪：德国艾本德股份公司，Eppendorf Mastercycler恒压恒流电泳仪：上海富众生物科学有限公司，Bio-Rad HV 164-5056水平电泳槽：六一仪器厂，DYY_III凝胶成像系统：美国 Bio-Rad 公司， Gel Doc XR+

电泳图,电泳图,文蛤

图 2-2 DNA 电泳图Fig.2-2 Electrophoretogram of DNA.2.2 PCR 扩增结果提取 6个地理群体文蛤的总 DNA后，使用不同引物进行 PCR 扩增分别得到8S rRNA 基因片段一、18S rRNA 基因片段二、18S rRNA 基因片段三、COI 基6S rRNA 基因，纯化后进行浓度为 1%的琼脂糖凝胶电泳，效果如图 2-3、2-4、-5 所示：
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4

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