鲤疱疹病毒2型ddPCR检测方法的建立及其抗体库的筛选

发布时间：2020-08-26 02:01

【摘要】：鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2),是一种高致病性双链DNA病毒。因该病毒是第2个分离自鲤科鱼类的疱疹病毒,国际病毒系统分类与命名委员会(ICTV)将其命名为鲤疱疹病毒2型,该病毒属于鱼疱疹病毒科(Alloherpesviridae),鲤疱疹病毒属(Cyprinivirus)。本研究建立了定量检测CyHV-2的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并且与实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法就其灵敏性、特异性、重复性和临床样品检测作了比较分析。结果表明,与RT-qPCR相比,ddPCR具有相同的特异性,其灵敏性比RT-qPCR方法低20倍。在定量CyHV-2 DNA时,ddPCR(R2=0.994)和RT-qPCR(R2=0.994)均表现出良好的线性关系,并且这两种检测方法的定量值呈正相关(R2=0.989)。但是,在定量检测相同稀释度CyHV-2 DNA时,RT-qPCR的定量值始终比ddPCR高10倍。ddPCR的组内和组间重复变异系数(CV)各为0.59%-11.26%和6.55%-23.21%,而RT-qPCR各为16.57%-27.56%和22.31%-56.73%,说明ddPCR具有更好的稳定性。在临床样品定量检测时,ddPCR的检出率稍高于RT-qPCR。本研究建立的ddPCR能够准确定量检测CyHV-2,将为CyHV-2相关研究提供有益参考。为获得可检测CyHV-2的单链抗体,本研究利用噬菌体抗体库技术,经过4轮淘选富集后获得2株抗CyHV-2单链抗体(scFv)。Dot blot结果分析表明,2个可溶性单链抗体均能特异性识别CyHV-2;Western blot结果显示,2个可溶性单链抗体的分子量约为27 kDa。由免疫组化试验结果可知2个可溶性单链抗体均能检测到CyHV-2在肝组织和鳃组织中的分布。ELISA试验结果表明可溶性单链抗体均不与CyHV-3、EHNV、CCV、ISNV发生交叉反应。本研究期望能为CyHV-2的快速检测提供借鉴,并为CyHV-2检测试剂盒的研发奠定基础。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.4

【相似文献】

相关期刊论文 前4条

1 张霞;李杰;郭巍;李国勋;;一种从多克隆抗体库快速分离高特异性抗体的方法[J];华北农学报;2008年05期

2 刘微;张敏;郭春燕;孟和;斯日古楞;哈斯;何俊霞;吉日木图;;骆驼纳米抗体在医疗领域研究进展[J];动物医学进展;2013年03期

3 王乃东;薛立群;许道军;袁安文;邓治邦;;鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建[J];畜牧兽医学报;2007年04期

4 ;[J];;年期

相关会议论文 前8条

1 王刚;刘玉峰;;人天然抗体库的构建及抗角蛋白抗体的筛选[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年

2 栗利芳;索勋;盛仅满;;伊氏锥虫抗体库的初步建立与效果检测[A];中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年

3 韦晓明;苏明权;杨安钢;温伟红;郝晓柯;;人抗体Fab段天然抗体库的建立[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

4 陈志南;李玲;;基于抗体的生物制药与转化医学研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

5 杜晓明;方佩华;李宁;;人源性促甲状腺素抗体Fab片段抗体库的构建筛选、鉴定[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

6 刘国振;刘斯奇;吴琳;;水稻抗体库及基于抗体的蛋白质组学[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年

7 韦晓明;苏明权;杨安钢;温伟红;郝晓柯;;人抗体Fab段天然抗体库的建立[A];第九届西北五省（区）检验医学学术会议论文汇编[C];2005年

8 杜晓明;方佩华;李宁;;人源性促甲状腺素抗体Fab片段抗体库的构建筛选、鉴定[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前5条

1 本报记者 王飞雁;义翘神州：做全球最大的抗体库[N];北京日报;2011年

2 冯卫东;美发现将骨髓干细胞转成脑细胞的抗体[N];科技日报;2013年

3 通讯员 刘超 记者 程守勤;可“封锁”H5N1病毒的抗体研制成功[N];健康报;2013年

4 记者　姜云飞;海归博士欲建抗体“世界工厂”[N];大连日报;2006年

5 本报记者 庄光平;京天成：让科研与市场比翼齐飞[N];经济日报;2012年

相关博士学位论文 前1条

1 焦永军;人源Na（？）ve Fab抗体库的构建和抗Met抗体片断的筛选及特征鉴定[D];南京医科大学;2005年

相关硕士学位论文 前4条

1 刘丹丹;猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）噬菌体免疫纳米抗体库构建及抗Cap纳米抗体的筛选[D];西北农林科技大学;2015年

2 傅文燕;新型全人抗HER2抗体的制备、优化、及抗肿瘤作用研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

3 何鲜;抗人肺泡表面活性蛋白A纳米抗体的制备及其靶向性的检测[D];苏州大学;2015年

4 赵欣;鲤疱疹病毒2型ddPCR检测方法的建立及其抗体库的筛选[D];华中农业大学;2016年

本文编号：2804514