草鱼树突状细胞的分离鉴定和益生芽孢杆菌对其功能的影响
发布时间：2020-12-20 10:31
树突状细胞（Dendritic cell,DC）在调控机体免疫中发挥着关键作用,通过抗原递呈作用将抗原物质呈递给T淋巴细胞从而决定免疫反应和免疫耐受,并分泌多种免疫相关细胞因子调控机体免疫活动。本研究旨在分离并鉴定草鱼（Ctenopharyngodon Idellus）树突状细胞,通过转录组学技术分析从草鱼肠道中分离出的一株枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）Ch9对草鱼DC基因表达的影响,探讨草鱼DC基因表达与机体免疫功能之间的联系。主要研究内容和试验结果如下:机械法分离获得草鱼脾脏单细胞悬液,体外培养5 d后,密度梯度离心法获得一类形态上具有典型树突样突起的细胞,Transwell迁移实验发现这类细胞在LPS与嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）刺激下,迁移细胞数量显著高于对照组和益生枯草芽孢杆菌处理组（B.Subtilis）。同种异体混合淋巴反应（Mixed Lymphocyte Reaction,MLR）表明这类细胞可显著激活同种异体淋巴细胞的增殖且呈剂量依赖性。RT-qPCR法检测细胞表面标记分子CD80/86和CD83的表达,LPS刺激12...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组分析流程
草鱼树突状细胞的分离鉴定和益生芽孢杆菌对其功能的影响A 文库的构建和 Illumina 测序品检测合格后，用带有 Oligo（dT）的磁珠，通过 A-T 互补 ployA 尾结合的方式富集真核生物的 mRNA。随后加入 fragmRNA 打断成短片段，以 mRNA 为模板，用六碱基随机引物（合成一链 cDNA，然后加入缓冲液、dNTPs 和 DNA polymerasA，随后利用 AMPure XP beads 纯化双链 cDNA。纯化的双链 cD复、加 A 尾并连接测序接头，然后用 AMPure XP beads 进行后进行 PCR 富集得到最终的 cDNA 文库。文库构建原理如图
草鱼树突状细胞的分离鉴定和益生芽孢杆菌对其功能的影响Millions base pairs sequenced）是每百万 fragments 中来自某一基因每千碱基长度的 fragments 数目，其同时考虑了测序深度和基因长度对 fragments 计数的影响，是目前最为常用的基因表达水平估算方法（Trapnell et al 2010）。本研究采用HTSeq 软件对各样品进行基因表达水平分析，使用的模型为 union。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类树突状细胞研究进展[J]. 陈孝煊,李思思,周成翀,吴志新. 水产学报. 2019(01)
[2]转录组学测序技术应用与市场分析[J]. 王跃,毛开云,王恒哲,马征远. 生物产业技术. 2017(05)
[3]新疆地区支气管哮喘患者IL-4基因甲基化的研究[J]. 韩继红,肖丽,都雯,彭颜晖,杨清. 新疆医科大学学报. 2017(09)
[4]益生芽孢杆菌对草鱼肠黏膜结构的保护作用[J]. 黄灿,张忠海,吴淑勤,张丁,李思思,陈孝煊,吴志新. 水生生物学报. 2017(04)
[5]抗生素在畜禽养殖业中的应用、潜在危害及去除[J]. 王彦斌. 农业开发与装备. 2015(12)
[6]转录组学技术在水产动物研究中的运用[J]. 罗辉,叶华,肖世俊,郑曙明,王晓清,王志勇. 水产学报. 2015(04)
[7]肠道菌群与疾病关系的研究进展[J]. 郭慧玲,邵玉宇,孟和毕力格,张和平. 微生物学通报. 2015(02)
[8]高通量测序技术在农业研究中的应用[J]. 张全芳,李军,范仲学,杨连群,步迅. 山东农业科学. 2013(01)
[9]产丙酮酸棒状杆菌及痤疮丙酸杆菌对树突状细胞的免疫调节作用[J]. 韩清珍,仝佳,赵阳,刘嫣芳,沈培,苏兆亮,邵启祥,焦志军,王胜军,许化溪. 免疫学杂志. 2011(07)
[10]饲料中益生菌对凡纳滨对虾生长、肠道菌群及部分免疫指标的影响[J]. 胡毅,谭北平,麦康森,艾庆辉,郑石轩,程开敏. 中国水产科学. 2008(02)
硕士论文
[1]大黄鱼脾脏转录组和表达谱分析以及过氧化物酶4结构与功能研究[D]. 母尹楠.国家海洋局第三海洋研究所 2011
本文编号：2927709
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组分析流程
草鱼树突状细胞的分离鉴定和益生芽孢杆菌对其功能的影响A 文库的构建和 Illumina 测序品检测合格后，用带有 Oligo（dT）的磁珠，通过 A-T 互补 ployA 尾结合的方式富集真核生物的 mRNA。随后加入 fragmRNA 打断成短片段，以 mRNA 为模板，用六碱基随机引物（合成一链 cDNA，然后加入缓冲液、dNTPs 和 DNA polymerasA，随后利用 AMPure XP beads 纯化双链 cDNA。纯化的双链 cD复、加 A 尾并连接测序接头，然后用 AMPure XP beads 进行后进行 PCR 富集得到最终的 cDNA 文库。文库构建原理如图
草鱼树突状细胞的分离鉴定和益生芽孢杆菌对其功能的影响Millions base pairs sequenced）是每百万 fragments 中来自某一基因每千碱基长度的 fragments 数目，其同时考虑了测序深度和基因长度对 fragments 计数的影响，是目前最为常用的基因表达水平估算方法（Trapnell et al 2010）。本研究采用HTSeq 软件对各样品进行基因表达水平分析，使用的模型为 union。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类树突状细胞研究进展[J]. 陈孝煊,李思思,周成翀,吴志新. 水产学报. 2019(01)
[2]转录组学测序技术应用与市场分析[J]. 王跃,毛开云,王恒哲,马征远. 生物产业技术. 2017(05)
[3]新疆地区支气管哮喘患者IL-4基因甲基化的研究[J]. 韩继红,肖丽,都雯,彭颜晖,杨清. 新疆医科大学学报. 2017(09)
[4]益生芽孢杆菌对草鱼肠黏膜结构的保护作用[J]. 黄灿,张忠海,吴淑勤,张丁,李思思,陈孝煊,吴志新. 水生生物学报. 2017(04)
[5]抗生素在畜禽养殖业中的应用、潜在危害及去除[J]. 王彦斌. 农业开发与装备. 2015(12)
[6]转录组学技术在水产动物研究中的运用[J]. 罗辉,叶华,肖世俊,郑曙明,王晓清,王志勇. 水产学报. 2015(04)
[7]肠道菌群与疾病关系的研究进展[J]. 郭慧玲,邵玉宇,孟和毕力格,张和平. 微生物学通报. 2015(02)
[8]高通量测序技术在农业研究中的应用[J]. 张全芳,李军,范仲学,杨连群,步迅. 山东农业科学. 2013(01)
[9]产丙酮酸棒状杆菌及痤疮丙酸杆菌对树突状细胞的免疫调节作用[J]. 韩清珍,仝佳,赵阳,刘嫣芳,沈培,苏兆亮,邵启祥,焦志军,王胜军,许化溪. 免疫学杂志. 2011(07)
[10]饲料中益生菌对凡纳滨对虾生长、肠道菌群及部分免疫指标的影响[J]. 胡毅,谭北平,麦康森,艾庆辉,郑石轩,程开敏. 中国水产科学. 2008(02)
硕士论文
[1]大黄鱼脾脏转录组和表达谱分析以及过氧化物酶4结构与功能研究[D]. 母尹楠.国家海洋局第三海洋研究所 2011
本文编号：2927709
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/2927709.html
