斑节对虾生长性状相关基因克隆及其SNP位点的筛选与验证
发布时间：2021-01-01 02:47
斑节对虾（Penaeus monodon）是对虾中体型最大、经济价值较高的海水养殖品种,为当前世界三大养殖虾类之一,也是我国传统养殖虾类中优质的对虾品种。我国已培育有生长快的“南海1号”新品种和多个优良性状的新品系,但面对我国养殖区域环境差异大,对虾品种多样性要求高的现状,继续推进斑节对虾的遗传育种研究,开展选育技术的创新和持续的良种选育,是对虾养殖业健康持续发展的有利保证。斑节对虾的头胸甲长、腹节长、体长和体质量等生长性状是影响斑节对虾质量和产量的重要经济性状。应用分子遗传标记,对斑节对虾生长性状的遗传基础进行解析,找到与优良生长性状关联的标记或基因,是斑节对虾遗传选育与品种改良研究的重要内容。本论文根据斑节对虾cDNA文库的EST序列,利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆斑节对虾组织蛋白酶L基因、胰蛋白酶基因、α淀粉酶基因;通过RT-PCR检测基因在斑节对虾各组织中的分布,以及在卵巢发育各期或各生长阶段的表达特征,探究这些基因在斑节对虾中的表达调控机制和功能。通过在四个野生群体中的重测序筛选SNP,采用SnaPshot技术对候选SNP位点分型检测,将基因型结果和生长性状进行...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
’RACE原理示意图（TaKaRa）
图 2-2 pMD18-T Vector 结构示意图 (TaKaRa)Fig.2-2 The structure of pMD18-T Vector (From specification of TaKaRa)2.1.2.4.4 转化与细菌培养(a) E.coli DH5α 感受态细胞的制备:1）从 E.coli DH5α 平板上挑取单克隆菌落，接种于装有 5 mLLB 液体培养基的离心管中，37 ℃振荡培养过夜。2）取 0.5 ml 过夜菌液接种于装有 50 ml LB 液体培养基三角瓶中，37 ℃振荡培养 3-4 h，至 A600nm值达到 0.4（0.3-0.5）时制备的感受态效果最好。3）将菌液转入 1 个 50 mL 无菌离心管中，冰浴 10~30 min。4）4℃条件下，4000 rpm 离心 10 min。弃上清，倒置离心管使培养液流出，可以置于滤纸上 1 min，使菌体尽量空干。5）小心加入 16 ml solutionA 悬浮菌体，冰浴 15 min。6）4℃，3500 rpm，离心 10 min，收集菌体。7）彻底弃上清液，菌体悬浮于 solution B。
图 2-3 斑节对虾总 RNAFig.2-3 Total RNAof Penaeus monodon PCR 产物结果二扩 PCR 反应后，凝胶电泳检测发现结果较好且条带清晰明亮，适合切胶回收，可以继续基
本文编号：2950805
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
’RACE原理示意图（TaKaRa）
图 2-2 pMD18-T Vector 结构示意图 (TaKaRa)Fig.2-2 The structure of pMD18-T Vector (From specification of TaKaRa)2.1.2.4.4 转化与细菌培养(a) E.coli DH5α 感受态细胞的制备:1）从 E.coli DH5α 平板上挑取单克隆菌落，接种于装有 5 mLLB 液体培养基的离心管中，37 ℃振荡培养过夜。2）取 0.5 ml 过夜菌液接种于装有 50 ml LB 液体培养基三角瓶中，37 ℃振荡培养 3-4 h，至 A600nm值达到 0.4（0.3-0.5）时制备的感受态效果最好。3）将菌液转入 1 个 50 mL 无菌离心管中，冰浴 10~30 min。4）4℃条件下，4000 rpm 离心 10 min。弃上清，倒置离心管使培养液流出，可以置于滤纸上 1 min，使菌体尽量空干。5）小心加入 16 ml solutionA 悬浮菌体，冰浴 15 min。6）4℃，3500 rpm，离心 10 min，收集菌体。7）彻底弃上清液，菌体悬浮于 solution B。
图 2-3 斑节对虾总 RNAFig.2-3 Total RNAof Penaeus monodon PCR 产物结果二扩 PCR 反应后，凝胶电泳检测发现结果较好且条带清晰明亮，适合切胶回收，可以继续基
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