抗鱼类神经坏死病毒和抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及特性分析
发布时间：2021-01-03 17:26
神经坏死病毒（nervous necrosis virus,NNV）是病毒性神经坏死症（viral nervous necrosis,VNN）的主要传染病原,感染全球多种海水和淡水鱼类,在鱼苗期的致死率可达100%,严重制约着全世界的鱼类养殖业的健康发展。由于鱼苗特异性免疫系统发育不全,目前对于感染NNV的幼鱼尚无有效的病毒防治措施。嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是引起鱼类细菌性败血症的主要致病菌。淡水鱼类细菌性败血症在我国是水产养殖过程中危害鱼类的种类最多、流行水域最广的一种急性传染病。由于抗生素的滥用导致大量耐药菌株的发生,研发新的防治手段刻不容缓。卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of yolk,IgY）来源于卵生动物,经血清转移并富集至卵黄中,具有产量高、成本低和理化性质稳定的特点,广泛应用于被动免疫,尤其是免疫系统尚未发育完全的幼仔。本研究制备了两种特异性病原卵黄抗体。我们克隆并表达了赤点石斑神经坏死病毒（Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV）的重组衣壳蛋白,并将其作为抗原免疫产...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鱼类野田病毒结构模型图
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位论文(CH1-CH3) 的 IgG 不同，IgY 的重链由一个可变区 (VH) 和四个恒定，CH2和 CH3之间有两个重链间二硫键，导致 IgY 分子量较 IgG链中，CH1和 CH2结构域被铰链区分开，使 Fab 片段（含有抗原结有灵活性和柔韧性。而 IgY 的重链不具有铰链区，降低了 IgY 与和柔韧性，可能存在空间阻位，影响抗体-抗原结合，但也同时增。IgY 的等电点在 5.7 到 7.6 的范围内，低于 IgG 的等电点 (6.疏水性 (Dávalos-Pantoja et al 2000)。另外 IgY C 区 β 折叠低于哺乳动域的构象更无序，稳定性较 IgG 更低。IgY 和 IgG 在生产和免疫见表 1-2。
后的 IgY (0.2 mg/mL) 与 1 MOI RGNNV 共孵育 2 h 后感染理后抗神经坏死病毒卵黄抗体在 GF-1 细胞中的免疫保护效结果经坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆及表达蛋白基因片段的克隆NV 感染 GF-1 细胞的总 cDNA 为模板，使用特异性引物 p经高保真 PCR 酶扩增出特异性的神经坏死病毒衣壳蛋白基4bp，如图 2-1A 所示。纯化后的基因片段和 pGEX-5X-1 进一化后在长出菌落的含Amp的LB固体平板培养基上挑取3-CR 获得阳性克隆菌并提取重组质粒。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类神经坏死病毒纳米探针的制备与特征分析[J]. 粟子丹,史成银,刘江春,王胜强. 中国动物检疫. 2015(06)
[2]鱼类神经坏死病毒研究进展与发展趋势[J]. 陈文捷,刘晓丹,胡先勤,王文文,秦真东,王瑶,周洋,刘小玲,林蠡. 水产学报. 2014(09)
[3]神经坏死病毒在赤点石斑鱼组织中的分布[J]. 刘晓丹,胡先勤,黄剑南,翁少萍,王文文,陈文捷,秦真东,董星星,周洋,刘小玲,姬伟,张学振,郭志勋,何建国,林蠡. 水生生物学报. 2014(05)
[4]6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析[J]. 田飞焱,吕建强,刘荭,李惠芳,刘宗晓,陈昌福. 华中农业大学学报. 2008(03)
[5]原位杂交技术在斜带石斑鱼神经坏死病毒检测中的应用[J]. 陈晓艳,何建国. 海洋科学. 2008(06)
[6]产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的两种抗原制品对蛋鸡免疫原性的对比研究[J]. 李晓宇,甄宇红,金礼吉,徐永平. 中国免疫学杂志. 2006(11)
[7]赤点石斑鱼病毒性神经坏死症的组织病理和电镜观察[J]. 林蠡,黄剑南,翁少萍,王云新,刘付永忠,张海发,何建国. 水产学报. 2005(04)
[8]鱼病毒性神经坏死病病毒（VNNV）不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应用[J]. 刘荭,史秀杰,高隆英,何俊强,江育林,陈焕春. 水产学报. 2004(06)
[9]闽南地区养殖石斑鱼病毒性神经坏死病初步研究[J]. 陈信忠,苏亚玲,龚艳请,黄丽莎,俞秀霞,陈延坎. 福建水产. 2003(03)
[10]鱼类DNA疫苗的研究进展[J]. 郑天伦,王国良. 宁波大学学报(理工版). 2002(04)
硕士论文
[1]致鱼细菌性败血症嗜水气单胞菌特异性卵黄抗体的制备及性能研究[D]. 邹栋良.大连理工大学 2010
本文编号：2955201
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鱼类野田病毒结构模型图
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位论文(CH1-CH3) 的 IgG 不同，IgY 的重链由一个可变区 (VH) 和四个恒定，CH2和 CH3之间有两个重链间二硫键，导致 IgY 分子量较 IgG链中，CH1和 CH2结构域被铰链区分开，使 Fab 片段（含有抗原结有灵活性和柔韧性。而 IgY 的重链不具有铰链区，降低了 IgY 与和柔韧性，可能存在空间阻位，影响抗体-抗原结合，但也同时增。IgY 的等电点在 5.7 到 7.6 的范围内，低于 IgG 的等电点 (6.疏水性 (Dávalos-Pantoja et al 2000)。另外 IgY C 区 β 折叠低于哺乳动域的构象更无序，稳定性较 IgG 更低。IgY 和 IgG 在生产和免疫见表 1-2。
后的 IgY (0.2 mg/mL) 与 1 MOI RGNNV 共孵育 2 h 后感染理后抗神经坏死病毒卵黄抗体在 GF-1 细胞中的免疫保护效结果经坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆及表达蛋白基因片段的克隆NV 感染 GF-1 细胞的总 cDNA 为模板，使用特异性引物 p经高保真 PCR 酶扩增出特异性的神经坏死病毒衣壳蛋白基4bp，如图 2-1A 所示。纯化后的基因片段和 pGEX-5X-1 进一化后在长出菌落的含Amp的LB固体平板培养基上挑取3-CR 获得阳性克隆菌并提取重组质粒。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类神经坏死病毒纳米探针的制备与特征分析[J]. 粟子丹,史成银,刘江春,王胜强. 中国动物检疫. 2015(06)
[2]鱼类神经坏死病毒研究进展与发展趋势[J]. 陈文捷,刘晓丹,胡先勤,王文文,秦真东,王瑶,周洋,刘小玲,林蠡. 水产学报. 2014(09)
[3]神经坏死病毒在赤点石斑鱼组织中的分布[J]. 刘晓丹,胡先勤,黄剑南,翁少萍,王文文,陈文捷,秦真东,董星星,周洋,刘小玲,姬伟,张学振,郭志勋,何建国,林蠡. 水生生物学报. 2014(05)
[4]6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析[J]. 田飞焱,吕建强,刘荭,李惠芳,刘宗晓,陈昌福. 华中农业大学学报. 2008(03)
[5]原位杂交技术在斜带石斑鱼神经坏死病毒检测中的应用[J]. 陈晓艳,何建国. 海洋科学. 2008(06)
[6]产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的两种抗原制品对蛋鸡免疫原性的对比研究[J]. 李晓宇,甄宇红,金礼吉,徐永平. 中国免疫学杂志. 2006(11)
[7]赤点石斑鱼病毒性神经坏死症的组织病理和电镜观察[J]. 林蠡,黄剑南,翁少萍,王云新,刘付永忠,张海发,何建国. 水产学报. 2005(04)
[8]鱼病毒性神经坏死病病毒（VNNV）不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应用[J]. 刘荭,史秀杰,高隆英,何俊强,江育林,陈焕春. 水产学报. 2004(06)
[9]闽南地区养殖石斑鱼病毒性神经坏死病初步研究[J]. 陈信忠,苏亚玲,龚艳请,黄丽莎,俞秀霞,陈延坎. 福建水产. 2003(03)
[10]鱼类DNA疫苗的研究进展[J]. 郑天伦,王国良. 宁波大学学报(理工版). 2002(04)
硕士论文
[1]致鱼细菌性败血症嗜水气单胞菌特异性卵黄抗体的制备及性能研究[D]. 邹栋良.大连理工大学 2010
本文编号：2955201
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