中国沿海贝类寄生派琴虫的分布及检测方法研究
发布时间：2021-02-11 06:15
派琴虫（Perkinsus spp.）是海产贝类中的重要原生动物寄生虫,广泛分布于世界各地。其中部分种类（P.marinus和P.olseni）能引起贝类派琴虫病,导致贝类大量死亡,造成经济损失。鉴于派琴虫对贝类的严重危害性,有必要对中国沿海分布的贝类寄生派琴虫进行物种多样性和宿主多样性研究,以便为派琴虫病害的科学预防和监测提供理论依据。本研究通过调查中国黄渤海、东海和南海常见贝类体内派琴虫的寄生状况,确定派琴虫的感染种类及地理分布;通过对广西沿海贝类进行季度监测,掌握派琴虫的寄生宿主多样性和流行规律;同时建立一种快速灵敏的实用检测技术。主要研究结果如下:1、中国沿海三大海域中选取9个采样地点,利用PCR方法检测8种贝类:太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）、香港牡蛎（C.hongkongensis）、缢蛏（Sinonovacula constrzcta）、菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）、毛蚶（Scapharca subcrenata）、皱肋文蛤（Meretrix lyrata）、皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）、杂色鲍...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组酶聚合酶扩增技术原理（引自Boyleetal.,2014）
图 2-1 采样位点分布图Fig 2-1 Distribution of the sampling locationsNA 提取，扩增和测序了检测派琴虫的存在，用无菌剪刀和镊子取一小块固定的鳃样品于 中，将乙醇晾干，利用蛋白酶 K 过夜消化后，参照软体动物组织 剂盒（美基生物，广州）说明书提取样品组织总 DNA，保存在-20用。用派琴虫属通用引物 PerkITS-85（5′-CCGCTTTGTTTGGMTCCC-3-750（5′-ACATCAGGCCTTCTAATGATG-3′）扩增派琴虫的核糖体 录间隔区（ITS-1）序列，目的序列长度为 703 bp[78]。PCR 体系如下2×PCR Mix 12.5 μL灭菌双蒸水 9.5 μL上游引物 PerkITS-85 1 μL下游引物 PerkITS-750 1 μL
GenBank 中选取派琴虫的代表序列构建系统进化树，进一步揭示派琴虫种类之间的亲缘关系。贝类派琴虫感染率的定义参考 Bush 等[79]，是指某种贝类感染某种派琴虫的数量占该检测贝类样品总数的比例。贝类派琴虫总感染率是指该检测贝类样品中所有感染派琴虫种类的贝类数量占该检测贝类样品总量的比例。使用 SPSS 20.0 软件对数据进行分析，派琴虫的感染率显著性差异采用卡方检验，显著性水平设置为 0.05。利用 Origin 8.0 软件和 MEGA5 软件作图。2.3 结果分析2.3.1 派琴虫及其宿主多样性本实验中，应用 PCR 方法共检测了 8 种贝类，1399 个样品。根据比对结果及系统进化树分析（图 2-2），共检测到三种派琴虫，分别为 P. chesapeaki、P. olseni 和 P. beihaiensis。
本文编号：3028662
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组酶聚合酶扩增技术原理（引自Boyleetal.,2014）
图 2-1 采样位点分布图Fig 2-1 Distribution of the sampling locationsNA 提取，扩增和测序了检测派琴虫的存在，用无菌剪刀和镊子取一小块固定的鳃样品于 中，将乙醇晾干，利用蛋白酶 K 过夜消化后，参照软体动物组织 剂盒（美基生物，广州）说明书提取样品组织总 DNA，保存在-20用。用派琴虫属通用引物 PerkITS-85（5′-CCGCTTTGTTTGGMTCCC-3-750（5′-ACATCAGGCCTTCTAATGATG-3′）扩增派琴虫的核糖体 录间隔区（ITS-1）序列，目的序列长度为 703 bp[78]。PCR 体系如下2×PCR Mix 12.5 μL灭菌双蒸水 9.5 μL上游引物 PerkITS-85 1 μL下游引物 PerkITS-750 1 μL
GenBank 中选取派琴虫的代表序列构建系统进化树，进一步揭示派琴虫种类之间的亲缘关系。贝类派琴虫感染率的定义参考 Bush 等[79]，是指某种贝类感染某种派琴虫的数量占该检测贝类样品总数的比例。贝类派琴虫总感染率是指该检测贝类样品中所有感染派琴虫种类的贝类数量占该检测贝类样品总量的比例。使用 SPSS 20.0 软件对数据进行分析，派琴虫的感染率显著性差异采用卡方检验，显著性水平设置为 0.05。利用 Origin 8.0 软件和 MEGA5 软件作图。2.3 结果分析2.3.1 派琴虫及其宿主多样性本实验中，应用 PCR 方法共检测了 8 种贝类，1399 个样品。根据比对结果及系统进化树分析（图 2-2），共检测到三种派琴虫，分别为 P. chesapeaki、P. olseni 和 P. beihaiensis。
本文编号：3028662
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