河南华溪蟹小分子功能性金属硫蛋白的分泌表达、纯化及功能鉴定

发布时间：2021-02-24 15:25

　　金属硫蛋白（metallothionein,MT）是一类普遍存在于生物体内的低分子量（6-7KD）,富含半胱氨酸的金属结合蛋白。MT对维持一些必需金属的体内代谢平衡及抵抗有毒金属毒性、清除自由基有重要意义。近年来,MT和肿瘤的关系成为研究的热点。MT参与肿瘤细胞增殖,凋亡,分化以及化疗耐药,影响治疗和预后。课题组在前期承担的国家自然科学基金（N0.30640051）中,不仅系统地研究了河南华溪蟹（Sinopotamon henanense）主要组织中MT的表达情况,MT与重金属蓄积的关系,而且还完成了河南华溪蟹MT cDNA全长序列的克隆。本论文在前期研究的基础上,利用基因重组技术,将河南华溪蟹MT基因亚克隆至phoA分泌型表达载体,构建phoA-MT重组表达质粒,导入大肠杆菌BL21（DE3）,利用低磷酸盐诱导,通过优化培养基,诱导温度,诱导时间和金属离子诱导浓度实现了河南华溪蟹重组MT小分子功能性蛋白的体外原核表达,并通过Ni亲和层析柱对表达蛋白进行纯化。之后,我们又通过紫外光谱扫描,羟自由基清除等实验对重组蛋白进行了功能鉴定。结果表明phoA-MT分泌型表达载体构建成功,工程菌经... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１河南华溪蟹ＭＴ基因ＰＣ民护增产物琼脂糖凝胶电泳分析??

?放置时，从负极开始要按照四层滤纸－＞电泳胶－＾ＰＶＤＦ膜＾四层滤纸的顺序放置如??图３．１，然后盖紧转移槽，电压１３?Ｖ，转移３０?ｍｉｎ；??（５）

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【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[3]河南华溪蟹重组金属硫蛋白的原核表达[D]. 张志明.山西大学 2011
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本文编号：3049574