文蛤（Meretrix meretrix）壳色花纹性状的分子遗传基础研究

发布时间：2022-12-10 09:07

　　文蛤（Meretrix.meretrix）是我国沿海水产养殖的重要经济贝类，其丰富多彩的壳色花纹可以遗传给后代，并且与生长、抗逆等经济性状密切相关，一些色泽鲜艳的文蛤商业价值显著提高。许多水生动物体色、壳色多态性的产生是由于体内控制色素合成的基因发生变异，而且红、黄体色的形成与自身类胡萝卜素的含量密切相关，培育壳色艳丽的文蛤新品系对文蛤养殖业具有重要的意义。在表观遗传学研究中，DNA胞嘧啶甲基化现象影响着生物体表型的改变，是真核生物基因组DNA修饰加工的方式之一。本研究以4个文蛤品系（红壳、黑斑、白壳和细纹）为试验材料，显微观察其外套膜色素带并采用分光光度计法对红壳和白壳文蛤外套膜中的类胡萝卜素含量进行测定；从文蛤转录组文库中筛选出类胡萝卜素积累过程的两个关键酶——GGPP合成酶（Geranylgeranyl pyrophosphatesynthase，GGPS）、β-胡萝卜素加氧酶（beta,beta-carotene9’,10’-oxygenase-like，crtO）的EST序列，利用RACE技术获得了GGPS和crtO基因的cDNA全长，并利用qRT-PCR技术对GGPS和cr... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
    1 类胡萝卜素的种类和功能
        1.1 海产贝类体内的类胡萝卜素种类
        1.2 类胡萝卜素的存在形式和部位
        1.3 海洋动物中类胡萝卜素的功能
        1.4 海洋贝类壳色多态性与类胡萝卜素的相关性
            1.4.1 影响壳色多态性的因素
            1.4.2 壳色多态性的分子机制
    2 类胡萝卜素合成过程中关键酶及相关基因的研究进展
        2.1 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶
        2.2 八氢番茄红素合成酶
        2.3 番茄红素合成
        2.4 胡萝卜素合成
    3 海洋经济贝类遗传育种方法研究进展
第二章 文蛤外套膜色素带的显微观察及其胡萝卜素含量的测定
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
            1.1.1 主要仪器
            1.1.2 主要试剂
        1.2 方法
            1.2.1 取样
            1.2.2 文蛤外套膜色素颗粒观察
            1.2.3 类胡萝卜素的分离及含量测定
        1.3 数据处理
    2 结果分析
        2.1 文蛤外套膜色素颗粒观察
        2.2 不同壳色文蛤外套膜边缘类胡萝卜素含量的比较
    3 讨论
        3.1 外套膜色素带与文蛤壳色形成之间的关系
        3.2 类胡萝卜素含量与文蛤壳色之间的关系
第三章 类胡萝卜素累积过程关键基因的克隆及其与文蛤壳色的相关性研究
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
            1.1.1 试剂
            1.1.2 菌株和质粒
            1.1.3 引物合成及测序
            1.1.4 仪器设备
        1.2 方法
            1.2.1 红壳文蛤外套膜总 RNA 提取
            1.2.2 文蛤 GGPP 合成酶基因的克隆
                1.2.2.1 cDNA 第一条链的合成
                1.2.2.2 cDNA 末端快速扩增
                1.2.2.3 目的条带割胶回收
                1.2.2.4 连接
                1.2.2.5 转化
                1.2.2.6 菌液 PCR
                1.2.2.7 测序
            1.2.3 GGPP 在不同壳色文蛤外套膜中的表达差异分析
                1.2.3.1 文蛤外套膜 RNA 提取(Trizol 法)
                1.2.3.2 cDNA 第一链合成
                1.2.3.3 GGPP 基因和 crtO 基因荧光定量引物的设计
                1.2.3.4 qRT-PCR
                1.2.3.5 荧光定量数据处理
                1.2.3.6 基因序列的生物信息学分析
    2 结果分析
        2.1 文蛤外套膜 RNA 的提取及纯度检测
        2.2 文蛤 GGPP 基因和 crtO 基因全长的序列特征
        2.3 文蛤 GGPP 基因和 crtO 基因氨基酸序列特征
        2.4 文蛤 GGPP 和 crtO 基因的表达差异分析
    3
        3.1 文蛤 GGPS 和 crtO 氨基酸序列及结构分析
        3.2 文蛤 GGPS 和 crtO 基因的表达分析
第四章 MSAP 标记技术在四种壳色文蛤中的差异分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要试剂的配置
        1.2 方法
            1.2.1 DNA 的提取及纯度检测
            1.2.2 四种壳色文蛤的 MSAP 分析
                1.2.2.1 DNA 酶切及连接
                1.2.2.2 预扩增
                1.2.2.3 选择性扩增
                1.2.2.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
        1.3 MSAP 引物筛选
        1.4 四种壳色文蛤群体甲基化差异分析
        1.5 数据处理
    2 结果分析
        2.1 基因组 DNA 的纯度检测结果
        2.2 酶切产物检测结果
        2.3 预扩产物检测结果
        2.4 选择性扩增检测结果
        2.5 MSAP 引物筛选
        2.6 壳色特异性引物筛选
        2.7 不同壳色文蛤的甲基化状态分析
        2.8 不同壳色文蛤甲基化差异位点的筛选
    3 讨论
第五章 小结
参考文献
在学研究成果
致谢



本文编号：3716474