迟缓爱德华氏菌糖酵解途径中持家酶的免疫原性分析

发布时间：2023-04-23 13:16

　　糖酵解途径中的酶具有代谢功能之外的众多生物学活性。不少研究报道显示,病原菌的三磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphata dehydrogenase,GAPDH)具有毒力相关作用和疫苗应用的潜力。本实验室的前期工作也发现鱼类重要病原菌迟缓爱德华氏菌的二磷酸果糖醛缩酶(Fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)具有免疫保护作用。本研究进一步探索了迟缓爱德华氏菌糖酵解途径中另外8个酶包括:己糖激酶(Hexokinase,HK)、磷酸葡萄糖异构酶(Phosphoglucose isomerase,PGI)、磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase,PFK)、磷酸丙糖异构酶(Triose phosphate isomerase,TPI)、磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,PGK)、磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mutase,PGM)、烯醇化酶(Enolase,ENO)、丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)是否也具有免疫保护效果。首先从本实验室所分离的强...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 文献综述
    1.1 迟缓爱德华氏菌及其危害
    1.2 反向疫苗学及其研究进展
        1.2.1 反向疫苗学
        1.2.2 反向疫苗学在迟缓爱德华氏菌上的应用
    1.3 糖酵解途径中部分酶的多功能性
        1.3.1 己糖激酶(Hexokinase,HK)
        1.3.2 磷酸葡萄糖异构酶(Phosphoglucose isomerase,PGI)
        1.3.3 磷酸果糖激酶Phosphofructokinase,PFK)
        1.3.4 磷酸丙糖异构酶(Triose phosphate isomerase,TPI)
        1.3.5 磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,PGK)
        1.3.6 磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mutase,PGM)
        1.3.7 烯醇化酶(Enolase,ENO)
        1.3.8 丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)
    1.4 鱼类免疫系统
        1.4.1 鱼类免疫器官
        1.4.2 鱼类免疫细胞及免疫因子
    1.5 本课题研究背景及意义
第2章 糖酵解途径中部分酶的基因克隆、蛋白表达及纯化
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 菌株与质粒
        2.2.2 引物
        2.2.3 细菌培养基及培养条件
        2.2.4 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 候选抗原蛋白重组表达载体的构建
        2.3.2 重组候选抗原蛋白的表达与纯化
        2.3.3 内毒素的检测与去除
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 各候选抗原蛋白在不同菌中序列比对分析
        2.4.2 各候选抗原蛋白重组质粒的构建
        2.4.3 蛋白的表达与纯化
        2.4.4 细菌内毒素的去除
    2.5 小结
第3章 候选抗原蛋白在斑马鱼上的免疫保护力分析
    3.1 引言
    3.2 实验材料
    3.3 实验方法
        3.3.1 斑马鱼驯养
        3.3.2 斑马鱼免疫与攻毒
        3.3.3 候选重组抗原蛋白相对免疫保护率的测定
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 斑马鱼预攻毒
        3.4.2 斑马鱼攻毒
    3.5 本章小结
第4章 候选抗原蛋白在大菱鲆上的免疫保护效果
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 菌株、细菌培养基及培养条件
        4.2.2 实验动物
        4.2.3 实验试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 大菱鲆免疫
        4.3.2 免疫后大菱鲆血清抗体效价测定
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 免疫后大菱鲆血清抗体效价分析
        4.4.2 大菱鲆血清中抗体与其它海洋病原菌的交叉反应
    4.5 本章小结
第5章 候选抗原蛋白免疫斑马鱼后免疫相关因子的表达差异分析
    5.1 引言
    5.2 实验材料
    5.3 实验方法
        5.3.1 斑马鱼脾脏及肾脏RNA提取和逆转录
        5.3.2 RT-qPCR
    5.4 结果与讨论
    5.5 本章小结
第6章 结论与展望
    6.1 主要结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
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