大口黑鲈Dmrt1基因的克隆与表达分析

发布时间：2023-07-26 20:33

　　大口黑鲈(Micropterus salmoides)俗称加州鲈,隶属鲈形目(Perciformes)、太阳鱼科(Centrarchidae)、黑鲈属(Micropterus),自然分布于美国、加拿大等淡水水域,是北美重要的游钓鱼类。大口黑鲈于20世纪80年代引进中国,由于其肉质鲜嫩且无肌间刺,广温性、生长快及易捕捞等优点,已成为我国重要的淡水养殖品种之一。目前对于大口黑鲈性别决定与性腺分化发育机制了解甚少。Dmrt1基因在多种无脊椎动物和脊椎动物性别决定和分化过程起着重要的作用,是此过程一个重要的转录因子,也是目前已知的在鱼类中最为保守的一个与性别决定有关的基因。本研究基于大口黑鲈转录谱数据,展开大口黑鲈Dmrt1基因的研究,分析其基因结构与功能、预测蛋白结构与功能、了解基因表达情况以及表达位置,为深入开展其在性别决定与分化中的作用研究奠定基础。主要研究内容如下:1.大口黑鲈Dmrt1基因克隆与序列分析在大口黑鲈基因组三代测序数据和性腺转录谱数据中筛选候选基因Dmrt1,分别获得51688 bp的Dmrt1 genomic序列和7011 bp的Dmrt1 cDNA序列。根据此测序结果...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.鱼类性别决定与分化机制
    2.性别分化相关基因
        2.1 Sox基因家族
        2.2 SF-1 基因
        2.3 Amh基因
        2.4 Dmrt基因家族
    3.Dmrt1 基因在性别决定中作用的研究进展
    4.研究目的和意义
第二章 大口黑鲈Dmrt1 基因的克隆与序列分析
    1.材料与仪器
        1.1 实验用鱼
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要实验仪器
    2.实验方法
        2.1 引物设计
        2.2 大口黑鲈基因组DNA提取与Dmrt1 genomic DNA扩增
            2.2.1 大口黑鲈基因组DNA提取
            2.2.2 大口黑鲈Dmrt1 genomic DNA获得
                2.2.2.1 扩增产物回收
                2.2.2.2 回收片段克隆
        2.3 大口黑鲈总RNA提取与Dmrt1 ORF序列的获取
            2.3.1 总RNA提取
            2.3.2 大口黑鲈ORF序列的扩增
                2.3.2.1 反转录获得cDNA
                2.3.2.2 Dmrt1 cDNA序列获取
                2.3.2.3 Dmrt1 ORF序列获取
    3.结果与分析
        3.1 大口黑鲈Dmrt1 genomic DNA序列扩增与分析
        3.2 大口黑鲈Dmrt1 ORF序列的扩增与分析
            3.2.1 ORF序列分析与聚类分析
            3.2.2 大口黑鲈Dmrt1 蛋白结构分析
                3.2.2.1 Dmrt1 基因ORF框氨基酸组成及亲水性分析
                3.2.2.2 大口黑鲈Dmrt1 的亚细胞定位分析
                3.2.2.3 Dmrt1 蛋白跨膜区域分析
                3.2.2.4 Dmrt1 蛋白高级结构预测
    4.讨论
第三章 大口黑鲈Dmrt1 基因的组织表达分析
    1.材料与仪器
        1.1 实验用鱼
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要实验仪器
    2.试验方法
        2.1 引物设计
        2.2 RNA提取
        2.3 RT-PCR模板的获得
        2.4 半定量PCR
        2.5 扩增片段测序
        2.6 Real-time PCR
    3.结果与分析
        3.1 大口黑鲈Dmrt1 基因半定量分析结果
        3.2 Dmrt1 Real-time PCR
    4.讨论
第四章 性腺组织学观察与组织原位杂交分析
    1.材料与仪器
        1.1 实验用鱼
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要实验仪器
    2.实验方法
        2.1 性腺组织学观察
            2.1.1 性腺组织石蜡包埋
            2.1.2 性腺组织学检测
        2.2 原位杂交
            2.2.1 原位杂交探针pGM-T-Dmrt1 的构建
            2.2.2 酶切
            2.2.3 体外反转录
            2.2.4 RNA探针纯化
            2.2.5 石蜡切片原位杂交
    3.结果与分析
        3.1 性腺组织学观察
        3.2 性腺原位杂交
    4.讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢



本文编号：3837506