牙鲆变态中甲状腺激素调控的靶基因筛选与验证

发布时间：2024-01-23 14:53

　　牙鲆(Paralichthysolivaceus)是研究鱼类变态发育的理想模型。甲状腺激素(Thyroid Hormone,TH)在牙鲆变态发育过程中发挥着决定性作用。甲状腺激素的生理作用主要是通过甲状腺激素受体(Thyroid Hormone Receptors,TRs)发挥,TRs有TRα和TRβ两种亚型。TR通过结合甲状腺激素反应元件(TRE)的特异性DNA序列—AGGT(C/A)A来调节靶基因的转录。为找出TH直接调控的靶基因,本研究以甲状腺激素受体TRαA、TRβ为对象,在HEK293T细胞中表达并纯化了牙鲆p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白,采用一种目的基因循环扩增与筛选(CAST,Cyclic Amplification and Selection of Target)的方法,得到一些与融合蛋白结合的特异性序列,对比牙鲆基因组后并用双荧光素酶报告实验和荧光定量PCR实验鉴定出TH调控的靶基因。主要结果如下:1.牙鲆TRαA、TRβ真核表达载体构建及融合蛋白表达纯化取实验室已有的p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重组真核表达载体,TA克隆...

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【学位级别】：硕士

图2-1p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重组质粒目的片段验证

图2-2p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白表达验证

图2-3随机文库验证

图2-4识别序列验证

本文编号：3882861