红鲫Wnt信号通路相关基因克隆和表达及应答镉金属胁迫的机制初探

发布时间：2024-03-22 00:02

　　Wnt信号转导通路在器官的发生、癌症以及多细胞生物体轴分化过程中起着重要作用。本论文主要以红鲫中的Gsk3β和Dvl2基因为研究对象。先采用RACE(rapid-amplification of c DNA ends)克隆技术获得红鲫Gsk3β和Dvl2基因的c DNA全长,再分别通过半定量RT-PCR技术和蛋白免疫印记(Western Blot)技术分析Gsk3β和Dvl2基因在m RNA水平和蛋白水平上的表达差异。最后通过一定浓度的镉处理,比较分析了Gsk3β与β-catenin的表达情况。结果显示:(1)Gsk3β基因全长为2195bp,编码421个氨基酸,预测蛋白分子量约为46846.40,等电点为9.05。比较不同物种氨基酸的同源相似性,Gsk3β蛋白序列和斑马鱼的相似度是98.5%,与小鼠的相似度是94.2%,与非洲爪蟾的相似度是92.1%,与人的相似度是94.7%。可以看出相似度比值都较高,表明在进化过程中红鲫Gsk3β基因中拥有较高的保守性。(2)结果表明Dvl2基因全长为3042bp,编码754个氨基酸,预测蛋白分子量约为82360.64,等电点为5.89。Dvl2基...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.Wnt信号通路转导
        1.1 经典Wnt信号通路
        1.2 Wnt/ PCP(planner cell polarity,PCP)通路
        1.3 Wnt/ Ca2+通路
    2.Wnt信号转导途径相关蛋白
        2.1 Dishevelled(DVL/DSH)蛋白
        2.2 Gsk3?蛋白
        2.3 β-catenin蛋白
        2.4 Axin蛋白
        2.5 APC蛋白
    3.镉胁迫的应激反应机制
        3.1 镉对动物的毒性机理
        3.2 本课题研究进展
第二章 红鲫Dishevelled2、Gsk3?基因的cDNA克隆
    1 实验材料和方法
        1.1 实验材料及试剂
        1.2 实验方法
    2.实验结果
        2.1 红鲫Dvl2 基因的cDNA序列及分析
        2.2 红鲫Dvl2 基因的系统发育分析
        2.3 红鲫Gsk3β基因的cDNA序列及分析
        2.4 红鲫Gsk3β基因的系统发育分析
    3.实验讨论
第三章 红鲫Dishevelled2、Gsk3β基因在红鲫胚胎不同时期及组织中的m RNA水平表达
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 红鲫八个组织Dvl2 m RNA水平的表达
        2.2 红鲫八个胚胎发育时期Dvl2 m RNA水平的表达
        2.3 红鲫八个组织GSK3βm RNA水平的表达
        2.4 红鲫八个胚胎发育时期Gsk3βm RNA水平的表达
    3 实验讨论
第四章 红鲫Dishevelled2、Gsk3β基因在红鲫胚胎不同时期及组织中的蛋白水平表达
    1 实验材料与方法
        1.1 实验材料与试剂配制
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 红鲫不同发育时期胚胎中Dvl2、GSK3β基因蛋白水平的表达
        2.2 Dvl2、GSK3β基因在红鲫不同组织中蛋白水平的表达
    3 实验讨论
第五章 不同倍性鱼应答镉金属胁迫的分子检测
    1 实验材料与方法
        1.1 实验材料与试剂配制
        1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 实验讨论
参考文献
致谢



本文编号：3934330