三角帆蚌Dmrta2-2基因的鉴定与表达分析

发布时间：2024-05-17 17:24

　　为了研究DMRT基因家族中Dmrta2-2 (Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor a2-2)基因在淡水蚌的性腺发育和性别分化等过程在发挥的作用,本研究从本实验室已有的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)cDNA库中筛选出Dmrta2-2 (HcDmrta2-2)短片段,利用RACE技术扩增和鉴定出了Hc Dmrta2-2基因。获得核苷酸序列全长为1 682 bp (登录号:MK372348),ORF (Open reading frame)区为1 170 bp,编码389个氨基酸。NCBI在线预测该基因保守位点,发现存在一个超保守的DM和DMA区域,氨基酸序列比对及系统发育树表明三角帆蚌与池碟蚌(Hyriopsis schlegelii)亲缘关系高达90%,在进化树中聚为一小支。通过实时荧光定量(qRT-PCR)和原位杂交检测Hc Dmrta2-2基因在各组织和发育时期的表达水平,发现该基因在成熟蚌的鳃、肝、肾、外套膜、闭壳肌、斧足及性腺中均表达,除了肝,其它各组织中雌雄表达差异均显著(p<0.05),...

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【部分图文】：

图1三角帆蚌Dmrta2-2基因cDNA完整序列及编码的氨基酸序列

从GenBank数据库中下载了7个代表性物种的Dmrta2氨基酸序列，同三角帆蚌(H.cumingii)HcD-mrta2-2进行比对，发现三角帆蚌(H.cumingii)与池蝶蚌(Hyriopsisschlegelii)相似度最高，达到90%，与虾夷扇贝(Mizuhop....

图2三角帆蚌与其他各物种Dmrta2蛋白序列比对分析

将上述以及的物种的物种Dmrta2蛋白序列用MEGA7.0构造NJ(Neighbor-joining)发育树，可明显看出三角帆蚌(H.cumingii)与池碟蚌(H.schlegelii)进化地位最近，聚为一小支，其次与太平洋牡蛎(Crassostreagigas)和虾夷扇....

图3三角帆蚌与其它物种Dmrta2氨基酸序列的系统发育树

胚胎期第0天、第3天、第6天、第9天和幼龄第1月～第8月性腺的表达结果显示，HcDmrta2-2基因在胚胎期第3天表达量达到峰值，接着迅速下降后维持在较稳定状态。幼龄阶段1～3月表达逐渐增加，3月龄后开始下降，并在4～8月维持在一个相对稳定状态(图5)。1.5HcDmrta....

图4HcDmrta2-2在雌雄各组织的分布检测

2龄三角帆蚌性腺原位杂交结果显示，HcDmrta2-2在精巢和卵巢中均有检测到表达信号。在卵巢中表达信号主要存在卵母细胞的细胞膜上，在精巢中信号较弱，主要存在于滤泡壁(图7)。2讨论

本文编号：3975890