L型凝集素和Toll、IMD信号通路关键因子在日本对虾先天免疫中的功能研究

发布时间：2024-06-29 20:21

　　免疫系统包括先天免疫和适应性免疫,无脊椎动物只有先天免疫。虽然在属于无脊椎动物的模式生物果蝇中,有关先天免疫研究的比较清楚,但是在海洋无脊椎动物中的研究有待投入更多的精力。本文以海洋无脊椎动物,日本囊对虾为研究对象,对其模式识别和免疫相关信号途径进行了研究。发现L型凝集素可能做为一种调理素辅助血细胞进行吞噬作用；Toll和IMD信号通路参与抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的免疫应答,并且发现同一个抗菌肽可以受这两条信号通路的调控。 (1)日本囊对虾的一种L型凝集素促进血细胞对病原菌的吞噬作用能力 L型凝集素(L-Type Lectin, LTLs)含有糖类识别结构域,与来源于豆科植物种子的凝集素在结构上的折叠方式相似。这是一类I型跨膜蛋白,在动物中LTLs主要参与了蛋白的分泌过程,与糖蛋白的筛选、转运和靶向运输有关。最近有研究表明LTLs可能参与了脊椎动物的免疫应答,但在无脊椎动物先天免疫中的功能尚未见报道。我们从日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)中发现了一种L型凝集素并命名为MjLTL1,它含有一个信号肽、一个L型凝集素结构域和一个跨膜结构域。在鳗弧菌感染的对虾血...

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

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目录
摘要
Abstract
符号说明
第一章 综述 无脊椎动物的先天免疫
    一、无脊椎动物的先天免疫系统
        1. 物理防御
        2. 细胞免疫
        3. 体液免疫
    二、无脊椎动物的免疫相关信号通路
        1. Toll信号途径
        2. IMD信号途径
        3. JAK/STAT信号途径
        4. JNK信号途径
        5. 信号通路之间存在协作
    三、L型凝集素
        1. L型凝集素的发现
        2. L型凝集素的结构
        3. L型凝集素的功能
    四、本研究的目的意义和技术路线
第二章 日本对虾L型凝集素提高血细胞对病原菌的吞噬能力
    一、前言
    二、材料与方法
        1. 试剂、仪器、载体和菌株
        2. 对虾的免疫刺激和总RNA的提取
        3. MjLTL1 and MjADAM的cDNA克隆
        4. MjLTL1和MjADAM系统发育分析
        5. 实时定量PCR(qRT--PCR)分析MjLTL1和MjADAM的组织分布
        6. 虾体感染弧菌后的MjLTL1和MjADAM时空表达模式
        7. rMjLTL1和PET30A在大肠杆菌中重组表达与纯化
        8. MjLTL1多克隆抗体的制备和western blot检测
        9. 细菌凝集实验
        10. 细菌结合实验
        11. 糖结合实验
        12. 细菌清除实验
        13. RNA干扰(RNAi)实验
        14 鳗弧菌的荧光标记和吞噬实验
    三、结果
        1. MjLTL1全长cDNA克隆和MjLTL1、MjADAM进化树的构建
        2. MjLTL1和MjADAM在弧菌感染的虾体中表达上调
        3. 重组表达的MjLTL1具有凝集细菌的能力
        4. rMjLTL1能够结合不同的细菌和多种多糖
        5. MjLTL1能够促进弧菌的清除
        6. 注射rMjLTL1提高了血细胞对弧菌的吞噬效率,干扰掉MjLTL1或者MjADAM使对虾血细胞吞噬细菌的效率降低
    四、讨论
第三章 Toll和IMD信号通路调控抗菌肽表达的机制研究
    一、前言
    二、材料与方法
        1. 试剂、仪器、载体和菌株
        2. 细菌的感染和总RNA的提取
        3. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD进化树的构建和同源比对
        4. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的组织分布和表达模式
        5. 对虾受S.aureus和V. anguillarum感染后抗菌肽的表达模式
        6. RNA干扰实验
    三、结果与分析
        1. 序列信息分析
        2. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的组织分布和表达模式
        3. 抗菌肽的在对虾感染V. anguillarum和S.aureus后的表达模式
        4. RNA干扰实验
    四、讨论
创新点总结
    1. L型凝集素
    2. Toll和IMD信号通路
参考文献
致谢
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附件
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本文编号：3997872