香港牡蛎淋巴因子Tal克隆和功能研究

发布时间：2024-09-28 16:09

　　香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)隶属软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、翼形亚纲(Pterimorpjia)、珍珠目(Pterioida)、牡蛎科(Ostreidae)、巨蛎属(Crassostrea),缺乏适应性免疫系统,主要依靠先天免疫系统抵抗外界病原的侵染,其中血淋巴的吞噬作用在清除病原过程中发挥着核心作用。本研究通过RACE、q RT-PCR、亚细胞定位、原核表达、血细胞计数、Edu增殖测定等手段,对香港牡蛎淋巴因子Tal进行结构和功能分析,探讨它们在香港牡蛎免疫防御过程中的作用。研究结果表明:1.香港牡蛎Tal基因的克隆与生物信息学分析Tal(T-cell acute lymphocytic leukemia)是一个参与造血和胚胎血管生成的重要转录因子,对于生物造血功能至关重要。为了研究Tal在香港牡蛎中的免疫功能,本研究采用RACE技术克隆了香港牡蛎Tal基因的c DNA全长序列,命名为Ch Tal,该基因全长812 bp,其中5’非编码区17 bp,3’非编码区135 bp,开放阅读框(ORF)660 bp...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 香港牡蛎的生物学概述与研究进展
        1.1.1 香港牡蛎的生物学概述
        1.1.2 贝类在免疫学研究的进展
    1.2 Tal基因的概述与研究进展
        1.2.1 Tal基因的概述
        1.2.2 Tal基因研究进展
    1.3 本文的研究目的与意义
        1.3.1 研究目的与意义
        1.3.2 实验研究技术路线
第二章 香港牡蛎Tal基因的克隆与生物信息学分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 本实验所使用的引物
    2.3 实验方法
        2.3.1 感受态细胞的制备
        2.3.2 总RNA提取和c DNA合成
        2.3.3 SMART RACE
        2.3.4 琼脂糖凝胶电泳及切胶回收
        2.3.5 片段连接
        2.3.6 转化感受态细胞
        2.3.7 阳性克隆的筛选与测序
        2.3.8 生物信息学分析
    2.4 结果与分析
        2.4.1 香港牡蛎Tal克隆片段的特点
        2.4.2 香港牡蛎Tal生物信息学分析
    2.5 讨论
    2.6 小结
第三章 香港牡蛎Tal组织分布和细菌感染下的表达模式
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
        3.2.4 本实验中所使用的引物
    3.3 实验方法
        3.3.1 细菌感染
        3.3.2 RNA提取与c DNA的合成
        3.3.3 实时定量PCR表达水平定量检测
        3.3.4 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 香港牡蛎Tal的组织分布
        3.4.2 香港牡蛎Tal在细菌感染下的表达模式
    3.5 讨论
    3.6 小结
第四章 香港牡蛎Tal亚细胞定位及在淋巴细胞再生中的功能
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验动物
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
        4.2.4 本实验所用的引物
    4.3 实验方法
        4.3.1 RNA提取和cDNA的合成
        4.3.2 pEGFP-Tal真核表达载体的构建
        4.3.3 细胞培养和转染
        4.3.4 pEGFP-Tal的亚细胞定位
        4.3.5 原核表达载体的构建
        4.3.6 目的蛋白的诱导与纯化
        4.3.7 血细胞计数与Edu增殖测定
        4.3.8 数据分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 香港牡蛎Tal的亚细胞定位
        4.4.2 香港牡蛎Tal的功能研究
    4.5 讨论
    4.6 小结
第五章 总结
参考文献
附录



本文编号：4006237