半滑舌鳎HH信号通路相关基因的克隆表达及功能分析
发布时间：2024-12-22 00:54
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国北方重要的海产经济鱼类之一,它味道鲜美,适应性强,雌性生长速度是雄性的2-3倍,因此了解半滑舌鳎的性腺分化与发生,攻克性别决定机制对单性育种、提高育种质量等意义重大。目前,半滑舌鳎性别决定机制尚不十分清楚,且没有发现决定其性别分化的决定基因。因此对半滑舌鳎性别决定相关基因进行功能分析显得非常紧迫,可以为人工控制半滑舌鳎性别提供基础资料。本研究根据半滑舌鳎全基因组测序获得的部分序列,通过中间序列验证及RACE末端扩增,得到半滑舌鳎HH信号通路csshh、csdhh、csptchl x1、csptchl x2、cssmo等5个基因的cDNA全长；通过RT-PCR分析了csshh、csdhh、csptchl x1、csptchl x2、cssmo、csglil等6个基因在早期胚胎发育、雌雄成体不同组织、雌雄性腺发育不同期的表达；检测了csshh、csdhh、csptchl x1等3个基因启动子区的甲基化程度；通过FISH定位分析了csptchl x1与csptchl x2在染色体中的位置；通过ISH定位分析了csdhh、csptch...
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
0 前言
1 文献综述
1.1 HH信号通路的组成
1.2 HH信号通路的功能
1.2.1 HH的结构和功能
1.2.2 PTCH的结构和功能
1.2.3 SMO的结构和功能
1.2.4 GLI的结构和功能
1.3 HH信号通路的转导
1.4 半滑舌鳎性别决定基因研究现状
1.5 本研究的目的与意义
2 半滑舌鳎HH信号通路csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo基因的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要仪器和试剂
2.1.3 方法
2.2 结果
2.2.1 遗传性别鉴定
2.2.2 生理性别鉴定
2.2.3 cDNA序列分析
2.2.4 同源比对及系统进化树构建
2.3 讨论
2.3.1 cDNA序列结构分析
2.3.2 系统进化树分析
3 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在早期胚胎的表达分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果
3.2.1 扩增标准曲线
3.2.2 csdhh在早期胚胎中的转录水平
3.2.3 csshh在早期胚胎中的转录水平
3.2.4 csptch1 x1在早期胚胎中的转录水平
3.2.5 csptch1 x2在早期胚胎中的转录水平
3.2.6 cssmo在早期胚胎中的转录水平
3.2.7 csgli1在早期胚胎中的转录水平
3.3 讨论
4 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在雌雄成鱼不同组织的表达分析
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果
4.2.1 csdhh基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.2 csshh基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.3 csptch1 x1基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.4 csptch1 x2基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.5 cssmo基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.6 csgli1基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.3 讨论
5 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在不同性腺发育时期的表达分析
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.2 结果
5.2.1 在仔鱼性腺中的转录水平
5.2.2 在成鱼性腺中的转录水平
5.3 讨论
6 csshh、csdhh及csptch1 x1基因启动区甲基化分析
6.1 材料与方法
6.1.1 性腺DNA提取
6.1.2 启动区克隆
6.1.3 甲基化检测
6.2 结果
6.3 讨论
7 半滑舌鳎csdhh、csptch1 x1及csptch1 x2在性腺中的组织原位杂交分析
7.1 材料与方法
7.1.1 实验材料
7.1.2 实验方法
7.2 结果
7.2.1 半滑舌鳎csdhh mRNA的组织原位杂交结果
7.2.2 半滑舌鳎csptch1 x1 mRNA的组织原位杂交结果
7.2.3 半滑舌鳎csptch1 x2 mRNA的组织原位杂交结果
7.3 讨论
8 半滑舌鳎csptch1 x1及csptch1 x2在雌性染色体中的定位
8.1 材料与方法
8.1.1 实验材料
8.1.2 实验方法
8.1.2.1 染色体制备
8.1.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文库中定位
8.1.2.3 荧光原位杂交
8.2 结果
8.2.1 半滑舌鳎雌雄染色体片的制备
8.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文库中定位
8.2.3 csptch1 x1及csptch1 x2基因的杂交探针制备
8.2.4 csptch1 x1及csptch1 x2基因在雌性染色体中的定位
8.3 讨论
9 半滑舌鳎csshh、csdhh基因真核表达载体构建及csshh、csptch1x1、csptch1x2原核表达载体构建
9.1 材料与方法
9.1.1 实验材料
9.1.2 实验方法
9.2 结果
9.2.1 csshh及csdhh基因信号肽预测结果
9.2.2 csshh及csdhh基因真核过表达载体酶切结果
9.2.3 csptch1 x1、csptch1 x2原核表达载体构建
9.2.4 csshh原核表达载体构建及蛋白诱导
9.3 讨论
10 结论与展望
10.1 结论
10.2 展望
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表的学术论文目录
本文编号：4019186
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
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摘要
Abstract
0 前言
1 文献综述
1.1 HH信号通路的组成
1.2 HH信号通路的功能
1.2.1 HH的结构和功能
1.2.2 PTCH的结构和功能
1.2.3 SMO的结构和功能
1.2.4 GLI的结构和功能
1.3 HH信号通路的转导
1.4 半滑舌鳎性别决定基因研究现状
1.5 本研究的目的与意义
2 半滑舌鳎HH信号通路csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo基因的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要仪器和试剂
2.1.3 方法
2.2 结果
2.2.1 遗传性别鉴定
2.2.2 生理性别鉴定
2.2.3 cDNA序列分析
2.2.4 同源比对及系统进化树构建
2.3 讨论
2.3.1 cDNA序列结构分析
2.3.2 系统进化树分析
3 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在早期胚胎的表达分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果
3.2.1 扩增标准曲线
3.2.2 csdhh在早期胚胎中的转录水平
3.2.3 csshh在早期胚胎中的转录水平
3.2.4 csptch1 x1在早期胚胎中的转录水平
3.2.5 csptch1 x2在早期胚胎中的转录水平
3.2.6 cssmo在早期胚胎中的转录水平
3.2.7 csgli1在早期胚胎中的转录水平
3.3 讨论
4 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1 x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在雌雄成鱼不同组织的表达分析
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果
4.2.1 csdhh基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.2 csshh基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.3 csptch1 x1基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.4 csptch1 x2基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.5 cssmo基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.2.6 csgli1基因在成鱼不同组织中的转录水平
4.3 讨论
5 半滑舌鳎csshh、csdhh、csptch1x1、csptch1 x2、cssmo、csgli1在不同性腺发育时期的表达分析
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.2 结果
5.2.1 在仔鱼性腺中的转录水平
5.2.2 在成鱼性腺中的转录水平
5.3 讨论
6 csshh、csdhh及csptch1 x1基因启动区甲基化分析
6.1 材料与方法
6.1.1 性腺DNA提取
6.1.2 启动区克隆
6.1.3 甲基化检测
6.2 结果
6.3 讨论
7 半滑舌鳎csdhh、csptch1 x1及csptch1 x2在性腺中的组织原位杂交分析
7.1 材料与方法
7.1.1 实验材料
7.1.2 实验方法
7.2 结果
7.2.1 半滑舌鳎csdhh mRNA的组织原位杂交结果
7.2.2 半滑舌鳎csptch1 x1 mRNA的组织原位杂交结果
7.2.3 半滑舌鳎csptch1 x2 mRNA的组织原位杂交结果
7.3 讨论
8 半滑舌鳎csptch1 x1及csptch1 x2在雌性染色体中的定位
8.1 材料与方法
8.1.1 实验材料
8.1.2 实验方法
8.1.2.1 染色体制备
8.1.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文库中定位
8.1.2.3 荧光原位杂交
8.2 结果
8.2.1 半滑舌鳎雌雄染色体片的制备
8.2.2 csptch1 x1及csptch1 x2基因在BAC文库中定位
8.2.3 csptch1 x1及csptch1 x2基因的杂交探针制备
8.2.4 csptch1 x1及csptch1 x2基因在雌性染色体中的定位
8.3 讨论
9 半滑舌鳎csshh、csdhh基因真核表达载体构建及csshh、csptch1x1、csptch1x2原核表达载体构建
9.1 材料与方法
9.1.1 实验材料
9.1.2 实验方法
9.2 结果
9.2.1 csshh及csdhh基因信号肽预测结果
9.2.2 csshh及csdhh基因真核过表达载体酶切结果
9.2.3 csptch1 x1、csptch1 x2原核表达载体构建
9.2.4 csshh原核表达载体构建及蛋白诱导
9.3 讨论
10 结论与展望
10.1 结论
10.2 展望
参考文献
致谢
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本文编号：4019186
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