Foxl2基因在红耳龟温度依赖型性别决定中的功能研究
发布时间：2025-01-06 07:05
温度依赖型性别决定（temperature-dependent sex determination,TSD）是一种典型的表型可塑性现象,主要存在于一些爬行动物中,例如红耳龟（Trachemys scripta）、密西西比鳄鱼（Alligator mississippiensis）、豹纹守宫（Eublepharis macularius）等。这类爬行动物没有性染色体、根据孵化温度范围来决定个体性别,其中,红耳龟能在较小的孵化温度范围（26℃～32℃）内产出不同性别比率的后代。不同于研究较深入的基因型性别决定（genetic sex determination,GSD）(主要存在于哺乳动物和鸟类),TSD的机制研究较为肤浅,许多谜团未被破解。本文对红耳龟性别决定机理展开研究,15期之前红耳龟性腺并未形成,随着性腺发育至热敏期（15-19期,也称性别决定时期）时,呈现出温度依赖性差异表达模式（如Dmrt1、Sox9、AMH等基因）。Foxl2作为一个遍布脊椎动物各门间高度保守的雌性基因,许多研究仅检测了Foxl2的表达模式,并未进行功能研究。本研究通过对红耳龟早期胚胎性腺进行转录组测序分析,筛...
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文献综述
1.1 脊椎动物类性别决定
1.1.1 哺乳动物类性别决定
1.1.2 鸟类性别决定
1.1.3 爬行动物类性别决定
1.1.4 两栖动物类性别决定
1.1.5 鱼类性别决定
1.2 Foxl2在脊椎动物性别决定中的研究进展
1.3 Foxl2在爬行动物中的研究进展
1.4 本研究目的和意义
第二章 红耳龟性腺转录组分析
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验仪器和主要试剂
2.1.2 实验材料
2.1.3 实验方法
2.1.3.1 性腺组织RNA提取、cDNA文库构建及测序
2.1.3.2 测序数据质量评估分析
2.1.3.3 基因表达水平的量化
2.1.3.4 差异表达分析
2.1.3.5 差异表达基因GO富集分析
2.1.3.6 KEGG通路富集分析
2.1.3.7 性别决定和性别分化相关基因的筛选
2.1.3.8 部分性别发育相关基因的验证
2.2 实验结果
2.2.1 测序数据质量评估
2.2.3 差异表达基因分析
2.2.4 性腺差异表达基因GO富集、KEGG分析
2.2.5 筛选性别决定和性别分化相关基因
2.2.6 部分性别发育相关基因的验证
2.3 讨论
第三章 红耳龟Foxl2 基因的cDNA克隆和表达分析
3.1 实验材料与方法
3.1.1 实验仪器和主要试剂
3.1.2 实验材料
3.1.3 实验方法
3.1.3.1 各组织RNA提取及cDNA合成
3.1.3.2 第一链cDNA合成
3.1.3.3 TA克隆
3.1.3.4 菌液PCR检测和送样测序
3.1.3.5 Foxl2基因序列拼接及生物信息学分析
3.1.3.6 半定量PCR和实时荧光定量PCR
3.1.3.7 数据分析
3.2 实验结果
3.2.1 红耳龟Foxl2 基因的cDNA全长克隆、同源性分析
3.2.2 Foxl2在红耳龟不同组织中的表达分析
3.2.3 Foxl2在红耳龟不同胚胎时期性腺中的表达分析
3.2.4 Foxl2关于温度的敏感性分析
3.2.5 雌二醇E2诱导的性逆转中Foxl2的表达分析
3.3 讨论
第四章 Foxl2的功能研究
4.1 实验材料与方法
4.1.1 实验仪器和主要试剂
4.1.2 实验材料
4.1.3 实验方法
4.1.3.1 Foxl2慢病毒载体的构建及龟胚侵染
4.1.3.2 RNA提取cDNA合成
4.1.3.3 实时荧光定量PCR
4.1.3.4 石蜡切片
4.1.3.5 苏木素-伊红(H&E)染色
4.1.3.6 免疫荧光染色
4.1.3.7 数据分析
4.2 实验结果
4.2.1 Foxl2功能缺失研究
4.2.1.1 Foxl2-慢病毒载体干扰后的有效性分析
4.2.1.2 Foxl2 基因敲低后FPT性腺组织形态学变化
4.2.1.3 Foxl2 基因敲低后FPT性腺雄性特异性基因表达变化
4.2.1.4 Foxl2 基因敲低后FPT性腺生殖细胞分布变化
4.2.2 Foxl2功能获得研究
4.2.2.1 Foxl2 基因过表达后MPT性腺组织形态学变化
4.2.2.2 Foxl2 基因过表达后MPT性腺雄性特异性基因表达变化
4.2.2.3 Foxl2 基因过表达后MPT性腺生殖细胞分布变化
4.3 讨论
第五章 小结与展望
5.1 小结
5.2 本文的创新点
5.3 本文的不足与展望
参考文献
附录 科研成果及资助单位(人)
致谢
本文编号：4023974
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文献综述
1.1 脊椎动物类性别决定
1.1.1 哺乳动物类性别决定
1.1.2 鸟类性别决定
1.1.3 爬行动物类性别决定
1.1.4 两栖动物类性别决定
1.1.5 鱼类性别决定
1.2 Foxl2在脊椎动物性别决定中的研究进展
1.3 Foxl2在爬行动物中的研究进展
1.4 本研究目的和意义
第二章 红耳龟性腺转录组分析
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验仪器和主要试剂
2.1.2 实验材料
2.1.3 实验方法
2.1.3.1 性腺组织RNA提取、cDNA文库构建及测序
2.1.3.2 测序数据质量评估分析
2.1.3.3 基因表达水平的量化
2.1.3.4 差异表达分析
2.1.3.5 差异表达基因GO富集分析
2.1.3.6 KEGG通路富集分析
2.1.3.7 性别决定和性别分化相关基因的筛选
2.1.3.8 部分性别发育相关基因的验证
2.2 实验结果
2.2.1 测序数据质量评估
2.2.3 差异表达基因分析
2.2.4 性腺差异表达基因GO富集、KEGG分析
2.2.5 筛选性别决定和性别分化相关基因
2.2.6 部分性别发育相关基因的验证
2.3 讨论
第三章 红耳龟Foxl2 基因的cDNA克隆和表达分析
3.1 实验材料与方法
3.1.1 实验仪器和主要试剂
3.1.2 实验材料
3.1.3 实验方法
3.1.3.1 各组织RNA提取及cDNA合成
3.1.3.2 第一链cDNA合成
3.1.3.3 TA克隆
3.1.3.4 菌液PCR检测和送样测序
3.1.3.5 Foxl2基因序列拼接及生物信息学分析
3.1.3.6 半定量PCR和实时荧光定量PCR
3.1.3.7 数据分析
3.2 实验结果
3.2.1 红耳龟Foxl2 基因的cDNA全长克隆、同源性分析
3.2.2 Foxl2在红耳龟不同组织中的表达分析
3.2.3 Foxl2在红耳龟不同胚胎时期性腺中的表达分析
3.2.4 Foxl2关于温度的敏感性分析
3.2.5 雌二醇E2诱导的性逆转中Foxl2的表达分析
3.3 讨论
第四章 Foxl2的功能研究
4.1 实验材料与方法
4.1.1 实验仪器和主要试剂
4.1.2 实验材料
4.1.3 实验方法
4.1.3.1 Foxl2慢病毒载体的构建及龟胚侵染
4.1.3.2 RNA提取cDNA合成
4.1.3.3 实时荧光定量PCR
4.1.3.4 石蜡切片
4.1.3.5 苏木素-伊红(H&E)染色
4.1.3.6 免疫荧光染色
4.1.3.7 数据分析
4.2 实验结果
4.2.1 Foxl2功能缺失研究
4.2.1.1 Foxl2-慢病毒载体干扰后的有效性分析
4.2.1.2 Foxl2 基因敲低后FPT性腺组织形态学变化
4.2.1.3 Foxl2 基因敲低后FPT性腺雄性特异性基因表达变化
4.2.1.4 Foxl2 基因敲低后FPT性腺生殖细胞分布变化
4.2.2 Foxl2功能获得研究
4.2.2.1 Foxl2 基因过表达后MPT性腺组织形态学变化
4.2.2.2 Foxl2 基因过表达后MPT性腺雄性特异性基因表达变化
4.2.2.3 Foxl2 基因过表达后MPT性腺生殖细胞分布变化
4.3 讨论
第五章 小结与展望
5.1 小结
5.2 本文的创新点
5.3 本文的不足与展望
参考文献
附录 科研成果及资助单位(人)
致谢
本文编号：4023974
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