太平洋鳕发育早期免疫系统相关基因的克隆分析及表达规律的研究

发布时间：2025-01-15 15:50

　　太平洋鳕(Gadus macrocephalus)是我国北方海域重要的经济鱼类。近年来,由于捕捞量剧增,导致其野生资源不断下降。本实验室的太平洋鳕人工繁育技术不断取得突破,但在育苗早期过程中仍会出现仔稚鱼突发性大量死亡现象。为解决这一瓶颈,本实验从太平洋鳕自身免疫系统出发,通过RAG1、Ig M和ISG15基因的转录水平来衡量太平洋鳕免疫系统的早期发育特点,以期为人工育苗早期阶段有针对性的做好疾病防疫工作提供理论依据。首先,根据已报道的其它硬骨鱼类的RAG1、Ig M和ISG15基因序列的保守区设计兼并引物,以太平洋鳕幼鱼的胸腺和头肾为实验材料,经过基因克隆测序,获得目的基因片段。为研究太平洋鳕发育早期免疫系统形成的机制,本实验建立了绝对荧光定量PCR检测方法,分别对目的基因在太平洋鳕各组织以及发育早期阶段中的表达水平进行了检测。另外,利用Western Blot技术从蛋白水平对RAG1在组织中的表达差异进行了分析。实验得出结果如下:太平洋鳕RAG1基因c DNA序列长3755 bp,包括一个1854 bp的ORF,可编码617个氨基酸残基,预测其分子量为69 k Da,Gen Bank...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1太平洋鳕头肾组织总RNAFig.1-1GelelectrophoresisoftotalRNAfromGadusmacrocephalus18s

CL显色液于PVDF膜上，暗室透明塑料薄膜覆盖PVDF膜。X射线摄影暗匣中曝光1min迅速浸于显影液中显影，然后液中定影10min以上。扫描仪成像，拍照。的克隆与分析组织中提取总RNA，进行琼度计测定3个总RNA提取液总RNA提取效果相对较好....

图1-4太平洋鳕RAG1标准品质粒电泳Fig.1-4GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromGadusmacrocephalus1000bp

图1-4太平洋鳕RAG1标准品质粒电GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromRNA提取洋鳕300dph幼鱼和成年雌性亲鱼的胸腺（、肠（In）、性腺（Go）的总RNA，进行琼光光度计测定其浓度和A26....

图1-7RAG1的熔解曲线

分别绘制出引物qRAG1（10μM，包括上、下游引物）不同的两个反应体系所对应的标准曲线，并分别得到回归方程和+37.50，R2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=0.998。根据斜率slop=10[-1/slope]-1可知，当斜率接近-3.....

图1-6荧光定量引物qRAG1b的检验Fig.1-6GelelectrophoresisofPCRproducttotesttheabsolutequantitativeprimerqRAG1b100bp

一章太平洋鳕RAG1基因cDNA的克隆与组分别绘制出引物qRAG1（10μM，个反应体系所对应的标准曲线，并2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=可知，当斜率接近-3.322时，PCR应体系中添加引物qRAG1（10μM，500

本文编号：4027521