香石竹OSDLike基因遗传转化研究

发布时间：2020-04-15 02:06

【摘要】：香石竹(Dianthus caryophyllus L.)名麝香石竹、狮头石竹、大花石竹,是石竹科石竹属多年生草本植物。作为云南省花卉产业的主要栽培品种之一,它的育种方式主要有以下几种:香石竹杂交育种、香石竹诱变育种和香石竹分子育种。其中分子育种技术在跨越种间隔离障碍、加速育种进程和获得新的变异方面是传统育种技术所无法比拟的。因此,将分子育种技术用于观赏植物育种会在很大程度上提升植株品质和其市场竞争力,是香石竹育种研究的重要目标。本研究首先对香石竹的再生体系和再生选择压力进行优化筛选,再通过农杆菌介导法将OSDLike基因导入到香石竹愈伤组织中,然后经过抗性筛选、PCR检测得到携带目的基因的转基因阳性植株。主要研究结果如下:1、香石竹三个品种茎尖和叶片再生体系的优化以香石竹的无菌组培苗为材料,优化了香石竹'马斯特'、'珍珠粉'、'罗加特'这三个品种茎尖和叶片再生体系。结果表明,同一品种的不同部位外植体材料再生对TDZ的浓度要求是不同的;不同品种的相同部位外植体材料的再生条件对TDZ的浓度要求也是有差异的。其中'马斯特'的茎尖材料适宜再生的TDZ浓度为100mg/L,而叶片材料的再生条件为40mg/L;'珍珠粉'的茎尖材料适宜再生的TDZ浓度为30mg/L,而叶片材料的再生条件为40mg/L;'罗加特'的茎尖材料适宜再生的TDZ浓度为90 mg/L,而叶片材料的再生条件为40 mg/L。2、香石竹Kan选择压力的确定以香石竹的无菌组培苗为材料,确定了香石竹'马斯特'、'珍珠粉'、'罗加特'这三个品种的Kan选择压力,减少了后期检测的工作量。结果表明,'马斯特'在90mg/LKan浓度下生长状况很差,死亡率大幅增长,适宜作为选择压力的浓度;'罗加特'在100mg/L的Kan浓度压力的胁迫下出现明显的长势较差,且植株矮小,叶片发黄的状况,适宜作为压力选择的浓度。3、三个香石竹品种的遗传转化将香石竹的茎尖材料接种在预培养培养基上培养4天,放入携带目的基因的农杆菌菌液中侵染 25 min,再转入到 MS+TDZ 0.8 mg/L+NAA 0.5 mg/L +AS 30 mg/L的培养基上暗培养4天,之后转入到MS+TDZ 0.8 mg/L +NAA O.lmg/L +400 mg/L Cef+80 mg/L Kan的培养基上2个月。待分化出不定芽后转入到MS+NAA 0.1 mg/L+BA 0.1 mg/L+80 mg/L Kan培养基上进行继代筛选培养。结果表明,不同品种的抗性筛选的愈伤分化率不同,'珍珠粉'的分化率最高,平均值为45%,'罗加特'的分化率最不稳定10%-63%。不同品种的抗性筛选的愈伤再生率也不同,'罗加特'的再生率最高,平均值为87%;'珍珠粉'的最低,平均值为12%。转基因植株提取DNA进行PCR检测之后,阳性植株41株。其中用载体OSDLa-PBI侵染的'马斯特'品种16株,用载体OSDLb-PBI侵染的'罗加特'品种6株,用载体OSDLc-PBI侵染的'马斯特'品种18株,用载体OSDLc-RNAi侵染的'罗加特'品种1株。
【图文】：

叶片材料,香石竹,生长状况,珍珠粉

香石竹的外植体材料都有不同程度的黄化甚至是枯死。通过表１的数据统逡逑计得到最适宜这三个品种香石竹的叶片材料再生并形成植株的ＴＤＺ浓度为４０逡逑ｍｇ／Ｌ，，具体生长状况如图２。逡逑１２逡逑

香石竹,珍珠粉,外植体,生长状况

外植体材料１０个，在同一时间段内以相同的方式转接到含有不同ＴＤＺ浓度的筛逡逑选培养基中，并放置到同样的环境下进行培养。香石竹的叶片材料在不同ＴＤＺ浓逡逑度条件下生长状况如图３所示，在４０－１００邋ｍｇ／Ｌ的ＴＤＺ浓度范围内香石竹的外植逡逑体材料都呈鲜绿色或深绿色，生长状况良好；０－３０ｍｇ／Ｌ的ＴＤＺ浓度范围内，香石逡逑竹的外植体材料都有不同程度的黄化甚至是枯死。通过表１的数据统计得到最适逡逑宜‘马斯特’‘珍珠粉’‘罗加特’这三个品种香石竹的茎尖材料再生并形成植株的逡逑ＴＤＺ浓度是不同的，适宜‘马斯特’茎尖材料再生的ＴＤＺ浓度为１００ｍｇ／Ｌ：适宜＇珍逡逑珠粉’茎尖材料再生的ＴＤＺ浓度为３０ｍｇ／Ｌ：适宜‘罗加特’茎尖材料再生的ＴＤＺ浓逡逑度为９０邋ｍｇ／Ｌ。具体对应长势图片如图４。逡逑
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S682.19

【参考文献】