拮抗放线菌的筛选及其生物有机肥对番茄青枯病的防控效果

发布时间：2020-05-08 13:37

【摘要】：番茄青枯病作为一种世界范围内的毁灭性土传病害,对我国番茄生产造成了巨大的损失,因此,迫切需要探索有效防控番茄青枯病的措施。生物防控作为控制植物病害的有效措施,近年来受到人们的高度重视。放线菌作为活性天然物质和药物的主要微生物来源,是人们最早研究并应用到生产实践中的生防微生物。许多研究表明,拮抗微生物和有机肥料结合制备的生物有机肥比单一的拮抗微生物菌剂能更有效地防控植物土传病害。本研究从多年连作的番茄根际土壤中分离筛选得到一株对番茄青枯菌(R.solanacearum ZJ3721)(简称青枯菌)具有显著抑制作用的放线菌菌株,对其进行鉴定,优化发酵条件,并制备放线菌生物有机肥,验证其对番茄青枯病的实际防控效果。主要研究结果如下:1.采取江苏省南京市麒麟镇的番茄连作土壤样品,以本实验室保存的番茄青枯菌R.solanacearum ZJ3721为指示菌,初筛分离纯化得到6株对番茄青枯病菌有较好拮抗效果的放线菌菌株,分别编号为F5、F6、F14、F18、F27、F41,其中菌株F6、F18表现出最强的抑菌作用。通过比较各菌株发酵滤液对番茄青枯菌的抑菌作用进行复筛,选择菌株F18作为实验菌株。菌株F18除对番茄青枯菌具有抑制作用之外,还对大丽轮枝菌,烟草根腐病病原菌,黄瓜、棉花、香蕉枯萎病菌均具有较强的抑制作用。2.通过对放线菌F18的形态及培养特征观察、生理生化特性测定,以及16SrRNA基因序列分析,菌株F18属于链霉菌属Streptomyces。3.通过对菌株F18液体发酵培养基成分和发酵条件进行优化发现,最适培养基成分为:可溶性淀粉 1%,大豆蛋白胨 0.4%,K2HPO4 0.05%,MgS04 0.05%,NaCl 0.05%,FeS040.01‰。使用有机氮源的发酵液比使用无机氮源表现出更强的抑菌活性。最适发酵条件为:pH8;培养温度28℃;装液量65mL/250mL;接种量6%;摇床转速180rpm;发酵时间132h。发酵条件优化后培养得到的发酵滤液对番茄青枯菌的抑菌能力进一步提高。菌株F18产生的抑菌活性物质主要为胞外代谢产物,水溶性强,可溶于甲醇和乙醇,难溶于其他有机溶剂。4.本试验研究发现加入体积质量比为10%的氨基酸酸解液的有机肥有利于菌株F18的生长繁殖和抑菌活性物质的产生,在堆肥中加入氨基酸酸解液5天后接入F18菌悬液,菌株F18的生长状况最好。盆栽和田间试验结果表明,氨基酸有机肥有利于菌株F18在土壤中的定殖,含有菌株F18的生物有机肥对青枯菌具有一定的抑制作用,并对植物生长具有一定的促进作用,对番茄青枯病表现出较好的防控效果,且防控效果优于单纯向土壤里灌施F18菌悬液。
【图文】：

技术路线图,技术路线,文献综述

图１－１技术路线逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ邋Ｒｏａｄｍａｐ逡逑

放线菌,拮抗,番茄,菌株

．２菌株Ｆ１８对病原菌的抑制效果测定逡逑采用对峙培养法观察测定Ｆ１８菌株对病原菌的抑制效果。将Ｆ１８菌株和病原分别涂布在ＰＤＡ平板上，于２８°Ｃ恒温培养箱中培养７ｄ。分别用直径为５ｍｍ器制成相同大小的菌块，，将拮抗放线菌Ｆ１８菌块接种于ＰＤＡ平板中央，再将原菌以每皿３个菌块的数量接种于放线菌Ｆ１８菌块一定距离的周围，于２８°Ｃ养箱倒]培养７？１０ｄ．观察测定菌株所产的抑菌圈ｍ径大小。逡逑结果分析逡逑１拮抗放线菌的初筛逡逑分离纯化得到６株对番茄青枯病菌有比较好拮抗效果的放线菌菌株，分别编、Ｆ６、Ｆ１４、Ｆ１８、Ｆ２７、Ｆ４１，其中邋Ｆ６、Ｆ１８、Ｆ２７、Ｆ４１邋来源于番茄根际土壤，两株则来源于番茄十．体十。逡逑
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S436.412.15

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