节瓜杂种种子纯度鉴定的SSR分析

发布时间：2020-06-13 19:35

【摘要】：节瓜(Benincasa hispida Cogn.var.chieh-qua How.),别名毛瓜、毛节瓜、小冬瓜等,是葫芦科(Cucurbitaceae)冬瓜属(Benincasa)一年生草本植物,是我国华南地区普遍消费的瓜类蔬菜。近年来节瓜种植面积不断扩大,节瓜种子市场逐渐扩大,新的杂交品种不断出现,节瓜种子纯度的快速鉴定越来越重要。种子在农业生产中作为最基本的生产资料,是农业生产中不可替代的要素,因此种子的质量检验工作在种子生产销售过程中是非常重要的一环,而种子纯度鉴定是种子质量检验工作中重要组成部分。本研究基于节瓜全基因组测序结果,设计适用于节瓜的SSR引物,运用SSR分子标记技术,建立室内快速鉴定节瓜杂种种子纯度的技术体系,对节瓜品种纯度进行鉴定。主要研究结果如下:1、通过研究DNA提取方法,初步探索出适用于节瓜SSR-PCR的DNA快速提取方法(碱处理法),比较了 DNA快速提取法和CTAB法,前者具有如下优点:(1)步骤简单易操作,不需要多次离心和反复抽提。(2)相对于CTAB法,节省大量时间,提取的样品越多,节省的时间越多。(3)试剂材料的消耗较少,试验成本低。2、以8份亲本材料DNA为模板,筛选了200对节瓜SSR引物,获得8对能够稳定扩增、带型简单,表现为父本显性和父母本共显性的引物可用于6个杂交组合纯度鉴定中。对课题组16份杂种种子进行快速鉴定,对比其中10份田间鉴定结果,验证了该技术体系的准确性。3、本研究运用节瓜子叶DNA快速提取方法(碱处理法)和SSR分子标记技术相结合,初步建立节瓜杂种种子SSR分子标记纯度鉴定技术体系。
【图文】：

提取方法,快速法,亲本材料

ＤＮＡ纯度低。用改良ＣＴＡＢ法提取的亲本材料ＤＮＡ经核酸蛋白仪检测，逡逑ＯＤ２６ｑ／ＯＤ２８0比值在１．７８－２．０２之间，表明所提取的ＤＮＡ质量较好，纯度较高，部分样品逡逑ＤＮＡ有ＲＮＡ残留。用１％的琼脂糖凝胶电泳检测两种方法提取ＤＮＡ质量（图３－１），逡逑表明改良ＣＴＡＢ法提取的ＤＮＡ比快速法提取的ＤＮＡ质量好，纯度高。逡逑■■■■■■■■逡逑图３－１不同ＤＮＡ提取方法电泳检测结果逡逑注：１－４为快速法，５－８为ＣＴＡＢ法逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＤＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逡逑Ｎｏｔｅ：邋１－４邋ｉｓ邋ａ邋ｆａｓｔ邋ｍｅｔｈｏｄ，５－８邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ＣＴＡＢ邋ｍｅｔｈｏｄ逡逑３．１．２不同ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ产物的影响逡逑为了验证快速法提取的ＤＮＡ质量是否能够满足ＳＳＲ－ＰＣＲ扩增的条件，利用在８逡逑份亲本材料中不能扩增出特异性条带的引物对快速法提取的杂种ＤＮＡ和其中４份使用逡逑２１逡逑

快速法,杂交组合,引物,PCR扩增

注：１－４为ＣＴＡＢ法，５－８为快速法逡逑Ｆｉｇ．３－２邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＤＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逡逑Ｎｏｔｅ：邋１－４邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ＣＴＡＢ邋ｍｅｔｈｏｄ，邋５－８邋ｉｓ邋ａ邋ｆａｓｔ邋ｍｅｔｈｏｄ逡逑３．２邋ＳＳＲ分子标记引物的筛选逡逑利用８份亲本材料对２００对引物进行亲本多态性鉴定，结果共有９０对ＳＳＲ引物可逡逑扩增出清晰稳定的产物，，其中有３４对引物在６个杂交组合间表现出多态性，多态性比逡逑率为３７．７８％，其中有８对引物可将６个杂交组合与其亲本区别开来（表３－１）。其中引逡逑物ｓｃａｆｆｏｌｄ４４４９在杂交组合Ｒ０５ｘＲ0７中表现为父母本共显性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ４７７５在杂交逡逑组合邋Ｒ０２ｘＲ０１、Ｒ０３ｘＲ０１、Ｒ０２ｘＲ０４、Ｒ０５ｘＲ０７邋中表现为父母本共显性；引物邋ｓｃａｆｆｏｌｄ５６７４逡逑在杂交组合Ｒ0３ｘＲ0ｌ、Ｒ0２ｘＲ0４中表现为父母本共显性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ７７０５在杂交组合逡逑Ｒ０２ｘＲ0ｌ、Ｒ0２ｘＲ0４中中表现为父本显性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ８９０２在杂交组合Ｒ０５ｘＲ０８中表逡逑ｘｘ、ｘ
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S642.9

【参考文献】