牡丹离体再生系统优化与遗传转化体系建立

发布时间：2020-07-01 05:08

【摘要】：牡丹(Paeonia Sufruticosa)市场前景广阔,然而,牡丹的种苗繁殖无法满足当前世界花卉、医药大市场对成品牡丹苗木的需求。为了尽快解决牡丹种苗快速工厂化生产和加快新品种培育进程这两大难题,开展牡丹的离体再生与遗传转化研究是具有重大意义的。本研究以牡丹品种'凤丹'为材料,建立并优化了牡丹成熟胚、幼胚、愈伤组织、子叶节、子叶片、土芽离体再生系统,并初步建立了牡丹子叶节遗传转化体系。在离体再生阶段分别研究了不同外植体、消毒方法、不同激素浓度及其配比对不定芽诱导、不定茅伸长及生根等离体再生过程的影响。结果发现:1、不同外植体的最佳不定芽诱导培养基分别为WPM+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA(成熟胚)、WPM+0.4 mg/L 6-BA+2 mg/L GA_3(幼胚)、WPM+3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 肌醇(愈伤组织)、WPM+0.3 mg/L 6-BA+2 mg/LGA_3(子叶节)、WPM+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/LNAA(子叶片)、WPM+1mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA(土芽);2、最佳的不定芽伸长培养基为:WPM+0.3 mg/L 6-BA+1.5 mg/L GA_3,伸长率为81.12%,芽的均伸长长度可达1.93 cm;3、采用嫁接法生根效果最佳,移栽后存活率可达66.54%。以牡丹子叶节为受体材料,研究了农杆菌菌株类型、乙酰丁香酮浓度、菌液浓度和侵染时间、共培养时间、pH值、温度对牡丹遗传转化体系的影响。初步建立了牡丹子叶节遗传转化体系。结果发现:选择EHA105(农杆碱型)作为外源基因导入的工程菌比较合适;适宜的乙酰丁香酮(AS)浓度(200μmol/L)、菌液浓度(OD600为0.8)、侵染时间(30min)、共培养时间(3 d)、共培养培养基pH值(5.4)、共培养温度(22℃)均能有效提高牡丹子叶节遗传转化系统的瞬时表达频率。应用该转化体系成功获得牡丹的转基因抗性苗,转化效率约为1.33%。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S685.11
【图文】：

幼胚,牡丹,不定芽

芽诱导过程中上述二者Ｈｆ能呈现相反的作用。本试验设置不同６－ＢＡ和ＧＡ３的浓度组合，逡逑对牡丹幼胚进行不定芽诱导培养，以探究ＢＡ与ＧＡ；对幼胚不定芽诱导的影响。逡逑在不定芽诱导培养基中培养３－４周后，幼胜逐渐愈伤化并诱导出不定芽（图１－２）。逡逑结果如表１－３所不，相较了＇不添加激素的培养基，添加激素的处理明显诱导效果更佳。逡逑当６－ＢＡ浓度在０－０．４邋ｍｇ／Ｌ、ＧＡ３浓度在０－２邋ｍｇ／Ｌ范围时，不定芽诱导率和平均不定芽逡逑数都逐渐增加，负６－ＢＡ为０．４邋ｍｇ／Ｌ、ＧＡ３为２邋ｍｇ／Ｌ时，不定芽诱导率和平均不定芽数逡逑分别为７７．３８％和１．９３个。，６－ＢＡ和ＧＡ３浓度较高时，虽然平均不定芽数较高，但不逡逑定芽长势纤细，诱导率较低，其原因可能是高浓度６－ＢＡ和0八３会产生拮抗作用，不利逡逑于不定芽的诱导。因此，牡几幼胚的最佳不定芽诱导培养基为：ＷＰＭ邋＋邋０．４ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ邋＋逡逑２邋ｍｇ／Ｌ邋ＧＡ３邋0逡逑表１－３不同激素组合对牡丹幼胚不定芽发生的影响逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－３邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｈｏｍｉｏｎｅｓ邋ｏｎ邋ｉｍｍａｔｕｒｅ邋ｅｍｂｒｙｏｓ逡逑ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ邋

牡丹,愈伤组织,子叶节,定芽

２．４子叶节不定芽分化研究逡逑在不定芽分化培养基中培养２－３周后，子叶节开始膨大、伸长，节端部位出现出芽逡逑点，４－６周后，分化出不定芽（图１－４）。从表中可以看出，相较于不添加激素的处理，逡逑添加激素组合处~i屮的＋定芽诱导效果明显更优

【参考文献】