萱草属植物快繁体系构建及杂种胚拯救研究

发布时间：2020-08-04 18:37

【摘要】：本试验以不同萱草属植物种子、未受精子房、叶片、花葶等器官为外植体分别构建了适宜的快繁体系,对不同倍性萱草属植物种间杂种进行了胚拯救及早期鉴定的研究。试验结果如下:(1)采用普通播种方式,'茄子花1号'的种子经培养箱催芽播种,种子集中于第5d到第12d露白,总共历时8d,发芽率为64.00%,萌发种子成苗率为81.25%。采用无菌播种方式,适宜的预处理方式为蒸馏水浸泡24 h后剥去种皮,露出白色胚乳;适宜的消毒方式为70%乙醇30 s+0.1%升汞5 min;种子露白集中于第3d到第7 d,总共历时5d,发芽率为78.00%。与普通播种方式相比,无菌播种方式缩短了种子发芽时间,且种子在培养基上生长较快。(2)'茄子花1号'未受精子房适宜的消毒方式为70%乙醇30 s+5%次氯酸钠3 min,污染率为2.00%;愈伤组织和不定芽诱导的适宜培养基为MS +3%蔗糖+2.0 mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA,诱导率为54.00%,不定芽繁殖系数为0.86。用上述培养基对133份不同萱草属植物未受精子房进行培养,其中有91份材料诱导出愈伤组织,诱导率在6.25%-71.43%之间;有48份材料诱导出不定芽,繁殖系数介于0.33-4.00。由此可见,萱草属植物不同材料未受精子房所适用的培养基有所差异,实际应用中要针对每个品种筛选合适的培养基进行子房外植体快繁。(3)'茄子花1号'组培苗叶片在两种不同激素组合的MS+3%蔗糖培养基上诱导出了愈伤组织,两种不同激素组合中6-BA与2,4-D配比分别为0.5mg/L+2.0mg/L和1.0 mg/L+5.0 mg/L,诱导愈伤组织所需时间分别为40 d和110 d左右。采用未受精子房适宜的不定芽诱导培养基,组培苗叶片不定芽繁殖系数达65。(4)'冲里花1号' 20 cm高花葶外植体适宜的消毒方式为70%乙醇30 s+0.1%升汞8 min;愈伤组织的适宜诱导培养基为:MS+3%蔗糖+2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA,诱导率为40.00%,采用未受精子房适宜的不定芽诱导培养基,花葶不定芽繁殖系数为2.65。对20 cm花葶进行分段诱导愈伤组织发现,花葶上、中、下三部分的愈伤组织诱导率依次降低。在花葶不同发育阶段采集'冲里花1号' 10cm、20cm、30cm、40cm和60 cm高度的花葶诱导愈伤组织发现诱导率随采集高度升高而降低。(5)诱导以上各类外植体不定芽生根的适宜培养基为:MS+3%蔗糖+0.25 mg/L NAA,生根率达100%。(6)在 MS+9%蔗糖+0.10mg/L6-BA+0.01mg/LNAA 培养基上,'宿迁 1 号'(2 n=3 x=33)♀×'东庄黄花'(2 n=2 x=22)杂交组合胚龄6 d的杂种胚珠诱导出1个愈伤组织,接种到前期筛选的不定芽和生根培养基上得到6株杂种苗。'宿迁3号'(2 n=3x=33)♀× '东庄黄花'(2n=2 x=22)♂杂交组合胚龄6d和7d的杂种胚珠发育成种子,种子为正常种子大小的一半。对6株杂种苗进行EST-SSR鉴定,发现杂种苗带型均不同于母本,可见杂种苗均不是由珠被发育而来,可能是由杂种胚发育而来。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S682.19
【图文】：

图４不同消毒方式对愈伤组织诱导的影响逡逑Ｆｉｇ．４邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ邋ｍｅｔｈｏｄｓ邋ｏｎ邋ｃａｌｌｕｓ邋ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ逡逑Ｄｌ：次氯酸钠消毒，茎段有变白现象；Ｄ２：次氯酸钠消毒，茎段两头开裂，愈伤极少；Ｄ３：逡逑０．１％升汞消毒，茎段变粗伸长，两端长愈伤组织逡逑Ｄ１：邋ＮａＣＩＯ邋ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，邋ｓｔｅｍｓ邋ｈａｖｅ邋ｗｈｉｔｅｎｉｎｇ邋ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ邋；Ｄ２：邋ＮａＣＩＯ邋ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，邋ｓｔｅｍ邋ｔｗｏ邋ｅｎｄｓ逡逑ｃｒａｃｋ邋ｗｉｔｈ邋ｆｅｗ邋ｃａｌｌｕｓ；邋Ｄ３：邋０．１％邋ＨｇＣｌ２邋ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，邋ｓｔｅｍ邋ｔｈｉｃｋｅｒ邋ａｎｄ邋ｅｌｏｎｇｅｒ，邋ｇｒｅｗ邋ｃａｌｌｕｓ邋ｂｏｔｈ邋ｔｗｏ邋ｅｎｄｓ逡逑

ｏ＿Ｌ＿Ｊ逡逑图６杂种胚拯救培养过程逡逑Ｆｉｇ．６邋Ｈｙｂｒｉｄ邋ｅｍｂｒｙｏ邋ｒｅｓｃｕｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｐｒｏｃｅｓｓ逡逑ＦＩ：刚接种；Ｆ２：发育成种子；Ｆ３：诱导出愈伤组织；Ｆ４：愈伤增殖；Ｆ５：长成植株逡逑Ｆ１：邋ｊｕｓｔ邋ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ；Ｆ２：邋ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ邋ｉｎｔｏ邋ｓｅｅｄｓ邋；Ｆ３：邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｃａｌｌｕｓ邋；Ｆ４：邋ｃａｌｌｕｓ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋；Ｆ５：邋ｇｒｅｗ邋ｉｎｔｏ逡逑ｐｌａｎｔｓ逡逑

图６杂种胚拯救培养过程逡逑Ｆｉｇ．６邋Ｈｙｂｒｉｄ邋ｅｍｂｒｙｏ邋ｒｅｓｃｕｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｐｒｏｃｅｓｓ逡逑ＦＩ：刚接种；Ｆ２：发育成种子；Ｆ３：诱导出愈伤组织；Ｆ４：愈伤增殖；Ｆ５：长成植株逡逑Ｆ１：邋ｊｕｓｔ邋ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ；Ｆ２：邋ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ邋ｉｎｔｏ邋ｓｅｅｄｓ邋；Ｆ３：邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｃａｌｌｕｓ邋；Ｆ４：邋ｃａｌｌｕｓ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋；Ｆ５：邋ｇｒｅｗ邋ｉｎｔｏ逡逑ｐｌａｎｔｓ逡逑

本文编号：2780936