草地早熟禾PpGA20ox1基因的克隆及功能研究
发布时间：2020-08-10 09:26
【摘要】：GA20ox基因是赤霉素合成途径的关键基因,是一类与植株伸长生长相关的基因,广泛参与植物各个阶段的生长发育过程。本研究根据从本课题组的草地早熟禾转录组数据库中筛选出来的GA20ox基因片段,用RACE方法,以草地早熟禾Baron品种为实验材料,得到PpGA20ox1基因,并通过各种在线软件对其进行生物信息学分析。利用q-PCR技术对PpGA20ox1基因在各个组织中的表达情况进行了分析,结果显示,该基因主要在叶片中表达,在叶鞘和根中的表达量较低。利用q-PCR对赤霉素和赤霉素合成抑制剂烯效唑处理条件下PpGA20ox1基因的表达变化情况进行研究,结果表明,PpGA20ox1基因受到这两种物质的抑制,反映了该基因的负反馈调节机制。克隆了该基因的启动子,长度为988bp,分析结果表明:PpGA20ox基因的启动子上除了包含TATA-BOX和CAAT-BOX等基本的元件外,还包含茉莉酸甲酯、脱落酸等激素响应元件、光响应元件、逆境胁迫响应元件等。利用Gateway方法构建了基因的pAL-PpCGA20ox1-GFP植物表达载体,对基因进行亚细胞定位分析,结果表明该基因定位在细胞质和细胞核中。利用花序侵染法将pAL-PppGA20ox1-GFP载体转化拟南芥,筛选出两个转基因株系种植T2代植株进行生理指标检测。与野生型WT拟南芥相比,两个转基因株系的植株高度、叶片大小、株丛大小、叶绿素含量明显大于WT,花期提前,莲座形态、细胞形态发生变化。用草地早熟禾的种子培养出可供实验的愈伤组织,用基因枪法转化了草地早熟禾,得到了再生植株。该研究对PpGA20ox1基因的功能进行了大量研究,为草坪草育种奠定了一定分子基础。
【学位授予单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S688.4
【图文】：
图１．１赤霉素信号转导模型（Ｓｕｎ邋Ｔ，邋２０１０）逡逑Ｆｉｇ邋１．１邋Ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ＧＡ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ逡逑１．２．４邋ＧＡ２０ｏｘ基因研宄进展逡逑ＧＡ２０ｏｘ属于可溶性的双加氧酶，是ＧＡ生物合成过程中的限速酶（姜志昂等，逡逑２０１３），ＧＡ２０ｏｘ能够通过氧化失去Ｃ０２的方式催化从ＧＡ１２到ＧＡ９以及ＧＡ５３到ＧＡ２0逡逑的一系列氧化反应，形成具有生物活性的ＧＡ４和ＧＡ！。ＧＡ２０ｏｘ对于底物亲和力的专逡逑一性不强，底物种类非常广泛。逡逑ＧＡ２０ｏｘ邋已经在高粱（５ｂ巧６／ｃｏ／ｏｒ）邋（Ｐｅｔｔｉ邋Ｃ，２０］５）、拟南芥逡逑Ａａ／／ａ？ａＬ．）（ＨｕａｎｇＳ邋等，１９９８）、玉米（Ｚｅｏ逦Ｌ．）（Ｖｏｏｒｅｎｄ邋Ｗ，２０１６）、柳枝稷（Ｐａｗ／ｃｗｍ逡逑ｖｚ＞ｐ＾ｗ／？Ｌ＿）邋（ＤｏＰＴ邋等，２０１６）、赤松（尸（ＰａｒｋＥＪ邋等，２０１５）等多种逡逑植物中克隆得到，并对其功能进行了大量详尽的研究，但在草地早熟禾中的研[偵形村义霞ǖ馈ｅ义希牵粒玻
本文编号：2787896
【学位授予单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S688.4
【图文】：
图１．１赤霉素信号转导模型（Ｓｕｎ邋Ｔ，邋２０１０）逡逑Ｆｉｇ邋１．１邋Ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ＧＡ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ逡逑１．２．４邋ＧＡ２０ｏｘ基因研宄进展逡逑ＧＡ２０ｏｘ属于可溶性的双加氧酶，是ＧＡ生物合成过程中的限速酶（姜志昂等，逡逑２０１３），ＧＡ２０ｏｘ能够通过氧化失去Ｃ０２的方式催化从ＧＡ１２到ＧＡ９以及ＧＡ５３到ＧＡ２0逡逑的一系列氧化反应，形成具有生物活性的ＧＡ４和ＧＡ！。ＧＡ２０ｏｘ对于底物亲和力的专逡逑一性不强，底物种类非常广泛。逡逑ＧＡ２０ｏｘ邋已经在高粱（５ｂ巧６／ｃｏ／ｏｒ）邋（Ｐｅｔｔｉ邋Ｃ，２０］５）、拟南芥逡逑Ａａ／／ａ？ａＬ．）（ＨｕａｎｇＳ邋等，１９９８）、玉米（Ｚｅｏ逦Ｌ．）（Ｖｏｏｒｅｎｄ邋Ｗ，２０１６）、柳枝稷（Ｐａｗ／ｃｗｍ逡逑ｖｚ＞ｐ＾ｗ／？Ｌ＿）邋（ＤｏＰＴ邋等，２０１６）、赤松（尸（ＰａｒｋＥＪ邋等，２０１５）等多种逡逑植物中克隆得到，并对其功能进行了大量详尽的研究，但在草地早熟禾中的研[偵形村义霞ǖ馈ｅ义希牵粒玻
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