姜瘟病病原拮抗菌的筛选与鉴定

发布时间：2020-08-18 10:26

【摘要】：本次课题的研究对象——生姜具有多种功效,不仅可以作为药用,而且还有发汗、温胃、润肺止咳、解毒等作用。但是随着我国生姜出口需求量的增加,在生姜栽培的过程中,容易感染以青枯菌为首的病害,姜瘟病严重的影响了我国生姜的品质,造成了大量生姜田地的绝收。姜瘟病病原主要是由青枯假单胞杆菌引起。目前在姜瘟病防治上主要采用物理、化学和生物防治,最常用的生物防治方法主要是通过筛选有效的拮抗菌,在生姜根茎部定殖对姜瘟病具有限制作用的有益菌株。但是目前的生物防治并没有良好方法应用于生产,为进一步寻求有效的防治方法,本次试验进行了拮抗青枯菌的筛选和鉴定。为获得良好的防治姜瘟病的方法,产生与扩大生姜的产量,笔者在结合前人研究的经验根本之上,拟安徽省生姜种植区的发病植株根际和健康姜的根际土中分离和筛选对姜瘟青枯菌有拮抗作用的根际促生菌,在对其拮抗性质进行初步研究的基础上,连系形态、培养特性,生理生化特征的鉴定以及16SrRNA的种属特异性序列分析等方法,对筛选到的拮抗菌株进行分类鉴定,从而对姜瘟病的生物防治提供经济有效的功能型菌株,为姜瘟病防治上奠定一定的理论基础,主要研究如下:(1)通过稀释涂布平板法于高氏、解磷和固氮三种选择性培养基上筛选和分离拮抗菌,最终于固氮培养基中筛选到两株拮抗菌,分别为N3和N5。随后将两株固氮拮抗菌进行生长竞争试验以检测其拮抗能力,发现N3菌株对姜瘟病具有较好的拮抗效果,拮抗能力为二级,能够有效的抑制姜瘟病青枯致病菌的发育生长;而N5菌株对姜瘟病青枯病的拮抗效果一般,拮抗能力为一级,较N3菌株拮抗姜瘟病效果弱。(2)将筛选到的固氮菌株N3和N5进行形态特征以及生理生化特性的鉴定,通过试验发现:产吲哚乙酸上,N3菌株总体产吲哚乙酸高于N5菌株,在姜瘟病拮抗菌中定植于生姜中,可以较N5菌株更好的促进植物生长;在溶磷能力上,N3菌株总体溶磷活力相对高于N5菌株,拮抗于生姜中可以更好的融合土壤中磷离子结合形成化合物,不易流失,预防土壤病害;在产铁载体能力上,N3菌株总体产铁载体能力也略高于N5菌株,可以很好的结合铁色素供给给微生物细胞中低分子量的物质,有效促进植物吸收土壤中微生物。(3)将N3和N5菌株进行分子鉴定,通过SDS-K法提取总DNA,通过电泳检测并且进行细菌的基因序列扩增,最终得到1500bp的扩增条带,并且通过测序鉴定N3和N5菌株分别是节杆菌和伯克氏菌。
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S436.32;S476
【图文】：

４结果与分析逡逑４．１拮抗菌的抑菌能力逡逑分离所筛选到的总菌株的数量，形状等情况，如下图４－１。逡逑数量逡逑筛选得到的菌株数逡逑４００邋—逦逦逦ｒ－｜逦—逦逡逑３５０邋￣￣ｒ—￣ｊ＇…—－逦逡逑ＩＺ邋：广二．．一＝．．．．．．－．－Ｉ邋＝ＺＴ＝￣７１：＝．．：二：．：－逦逡逑２0Ｑ邋－Ｉ逦Ｊ；逦逦邋Ｉ邋■菌株数Ｉ逡逑１５０邋－■逦ｒｒ￣ｒ逦ｍ－逦ｒｎ逦■逦逦逦—＇逦＾逡逑５０邋－１—＇邋逦—邋ｆ逦ｒ．邋－逦逦逡逑0逦ｒ邋邋ｉ逦‘逦逦逦％邋；邋ｌ＂；邋＂：邋－１逦？■■■—■■—逡逑１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－２邋１０－３逡逑解磷逦高氏逦固氮逦完全逡逑逦逦逦１浓度逡逑图４－１筛选总菌株数分布图逡逑Ｆｉｇ．４－１邋ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ邋ｔｏｔａｌ邋ｓｔｒａｉｎ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｍａｐ逡逑结合图４－１能够看出，选择性培养基中高氏培养基总体涂布得到的菌株数逡逑最多，固氮居第二，再对得到的菌株进行复筛，于固氮培养基中筛选到两株具有逡逑透明抑菌圈的菌株，证明姜瘟病的青枯菌能够被这两种菌株抑制生长，但是这两逡逑种菌株的抑菌圈大小不同，其拮抗能力也存在差异，如下图４－２，分别编号为固逡逑氮３邋（左）、固氮５邋（右）。逡逑图４－２具有拮抗性质的固氮菌（左Ｎ３，右Ｎ５）逡逑Ｆｉｇ．邋４－２邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ邋ｆｉｘｉｎｇ邋ｂａｃｔｅｒｉａ邋ｗｉｔｈ邋ａｎｔａｇ

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所得到的拮抗固氮菌Ｎ３、Ｎ５的抑菌圈大小等记录如下图４－３、表４－１。逡逑１１Ｌ邋Ｊ逡逑图４－３抑制试验逡逑Ｆｉｇ．邋４－３邋ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ邋ｔｅｓｔ逡逑表４－１姜痕病拮抗菌的拮抗能力逡逑Ｔａｂｌｅ邋４－１邋Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ邋Ａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ邋Ｂａｃｔｅｒｉａ邋ｏｆ邋ｇｉｎｇｅｒ邋ｂｌａｓｔ逡逑拮抗菌逦抑菌圈宽度Ｒ１邋菌落半径Ｒ２逦Ｒ１／Ｒ２逦拮抗能力逡逑（ｃｍ）逦（ｃｍ）逡逑Ｎ３逦０．６逦０．５５逦１．０９逦＋邋＋逡逑Ｎ５逦０．４逦０．５逦０．８逦＋逡逑结合表４－１可以看出，所筛选到的２株姜瘟病的拮抗固氮菌，Ｎ３菌株对姜逡逑瘟病具有较好的拮抗效果，其抑菌圈的宽度为0．６ｏｎ，Ｒ１／Ｒ２为１．０９，拮抗能力逡逑为二级，能够有效抑制姜瘟病青枯致病菌的生长；而Ｎ５菌株对姜瘟病青枯病的逡逑拮抗效果一般，其抑菌圈宽度是0．４ｃｍ，Ｒ１／Ｒ２为０．８，拮抗能力为一级，较Ｎ３逡逑菌株拮抗姜瘟病效果弱。逡逑４．２拮抗菌的生理生化指标逡逑４．２．１吲哚乙酸浓度逡逑用Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ邋’邋ｓ反应法于紫外分光光度计下测得数值，并绘出标准曲线如逡逑下图４－４。逡逑１８逡逑

【参考文献】

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本文编号：2796108