侧耳属不同品种原生质体制备再生及融合技术的应用研究

发布时间：2020-10-13 22:15

　　 原生质体技术是新兴的细胞工程技术,在去除细胞壁的基础上,可进行细胞杂交,有利于突破种、属界限、缩短育种周期、可实现远缘物种基因融合。本试验从侧耳属真菌品种中,选取平菇、秀珍菇、鲍鱼菇三个种类,研究了原生质体制备和再生条件,包括稳渗剂种类、菌龄、酶解温度及时间、再生培养基种类。试验设计采用单因素试验,确定了平菇、秀珍菇、鲍鱼菇原生质体制备、再生的最佳条件并筛选了优势的单核菌株,为冀中南地区侧耳属菌株选育提供技术应用依据。⑴平菇品种选用性状优良的“680”为材料。研究结果表明,原生质体制备产量最高的条件是以采用固体培养菌丝的方式,0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,取0.03g菌丝,在浓度为2%的溶壁酶酶解液中30℃酶解2.5h,菌龄8d,获得原生质体量为2.6×10~7个/mL。优化条件下得到的原生质体再生时间7d,再生率达6%;⑵秀珍菇品种选用“中农袖珍”为材料,研究结果表明,原生质体产量最高的条件是采用固体培养菌丝方式,以0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,取0.04g菌丝,浓度为2%的溶壁酶酶解液中35℃酶解2h,菌龄为8d,获得原生质体量为2.4×10~7个/mL。优化条件下得到的原生质体再生时间6d,再生率达0.7%;⑶以本实验室保存的鲍鱼菇菌丝为材料,研究结果表明,原生质体产量最高的条件是液体静置培养的菌丝体,以0.6mol/L蔗糖做稳渗剂,以0.04g菌丝量在浓度为2%的溶壁酶酶解液中30℃酶解2h,菌龄为10d,获得原生质体量为1.2×10~7个/m L。优化条件下得到的原生质体再生时间12d,再生率达0.3%;本试验在侧耳属品种(平菇、秀珍菇、鲍鱼菇)中,原生质体制备与再生的基础上筛选出优势单核菌株,以筛选出的平菇、鲍鱼菇的单核菌株作为亲本菌株,利用融合剂PEG进行融合,最终获得两株融合子R1、R2。通过显微镜观察锁状联合和拮抗试验,从菌丝特征和生化水平上确定了融合子。通过酯酶同工酶证明融合子R1、R2具有双亲的特异条带,ISSR分子标记表明融合子含有双亲的遗传物质。
【学位单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S646
【部分图文】：

生率=（再生培养基菌落数-PDA 培养基上长的菌落数）/接种数 平菇原生质体制备结果与分析1 渗稳剂种类对原生质体产量的影响析天平称 0.02g 菌丝放入以 0.6mol/L 甘露醇、蔗糖、氯化钾配制的中，30℃酶解 3h，每隔 0.5h 把离心管从水浴锅拿出到超净工作台球计数板上计算原生质体数量，试验结果如图 2-1。从图中可以看做稳渗剂，原生质体的产量一直很低，远远低于甘露醇和蔗糖。以蔗糖做渗稳剂在 2h 产原生质体量差距不大，分别为 15.8×l06个l06个/mL 甘露醇在 2h 达高峰后，随后开始下降，蔗糖在 2.5h 达高质体量为 20.3×l06个/mL。两种稳渗剂产量达到高峰后随着酶解时又呈下降趋势。

河北工程大学硕士学位论文.3.2 温度对原生质体产量的影响0.02g 菌丝用分析天平称好，放入配好的酶液中，分别在 25℃、30、40℃条件下酶解 3h，每个温度下每隔 0.5h 取样测原生质体数量度在不同的酶解时间产原生质体量如图 2-2。从图中可以看出，25时原生质体的产量较低。30℃和 35℃在 2.5h 产原生质体量同时达分别为 2.36×l07个/mL 2.33×l07个/mL，随后开始下降，平菇制备时温度在 30℃产量最高。

图 2-3 菌丝量对原生质体产量的影响Fig. 2-3 The effect of biomass of mycelium on the number of protoplas4 酶解时间对原生质体产量的影响3g 菌丝用分析天平称好后放入配制好的酶解液中，30℃酶解，在不同时间取样测定原生质体产量，结果如图 2-4 所示，在，原生质体量迅速增加，折线图斜率很大。在 2.5h 时达到产×107个/ml，随后原生质体产生量逐步下降，故制备鲍鱼菇的解时间 2.5h 为宜。生质体产量×原菌丝量/g
【参考文献】

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本文编号：2839760