马缨杜鹃基因表达内参的筛选

发布时间：2020-10-16 06:41

　　 马缨杜鹃(Rhododendrondelavayi Franch.)是杜胃鹃属(Rhododendron)常绿杜鹃亚属(Subgen.Hymenanthes)的多年生高山木本花卉,具有较高的观赏和药用价值,同时作为重要的原始育种亲本,具有重要科学研究与开发利用价值。迄今,马缨杜鹃的全基因组序列已经发布,势必助推杜鹃属植物在分子生物学研究领域的快速发展。然而,有关基因表达内参基因的筛选研究较少,有待进一步充实完善。本研究以马缨杜鹃为研究对象,选取了 11个在木本植物中的常用候选内参基因(GAPDH、Actin、、EF1a、、Tubulina-5、、Ubiquitin、、UEP、、UEC11、UEC2、、TIP41-LIKE FAMILYPROTEIN、Tubulin beta、TATAbindingprotein),采用实时荧光定 PCR技术分析了这11个候选内参基因在马缨杜鹃成年及幼年植株的不同发育时期及受干旱胁迫条件下叶片样品中的表达稳定性。综合内参基因稳定性评价软件qBASE和NormFinde的分析结果,为不同试验样品集筛选最佳内参基因或组合,研究结果如下:1.本研究选取设计的11个常用候选内参基因的引物,经实时荧光定量PCR检测,均能在马缨杜鹃基因组中扩增出相应的目的片段,且扩增特异性和扩增效率(94%-106%)均满足本研究中内参基因筛选的要求。2.本研究通过qBASE与NormFinder两种内参基因稳定性评价软件综合分析11个常用候选内参基因在马缨杜鹃成年植株(成熟叶、花芽、雌蕊、雄蕊及花瓣)与幼年植株样品集中的表达稳定性。研究发现在成熟叶样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+Actin;在花芽样品集中,最适内参基因组合为Tubulin-β+UEC1;在不同花组织器官样品集中,最适内参基因组合为EF1a+Tubulin-β;在马缨杜鹃成年植株不同组织部位样品集中,最适内参基因组合为UEC1+ GAPDH+ TIP41+UEP 在马缨杜鹃幼年植株不同组织部位样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+ UEC1;在成年与幼年植株所有样品集中,最适内参基因组合为GAPDH+Actin。3.选择表达稳定性较好的内参基因GAPDH检测干旱响应基因NCED1在不同干旱胁迫处理时间下的表达情况,发现NCED1在第9-13天中的表达符合预期趋势。在此基础上,筛选出表达稳定性较好的内参基因组合为Actin+UEC1表达稳定性较差的内参基因组合TIP41+UEC2 通过比较两个内参组合在干旱响应基因NCED1的表达模式,研究结果发现Actin、UEC1是无论是作为组合还是单个内参,NCED1的表达丰度都较高,且符合预期表达趋势。以上研究结果促进马缨杜鹃关于内参基因研究方面的研究进展,也为其他杜昌鹃属植物基因表达内参基因筛选方面研究提供一定的技术参考。
【学位单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S685.21
【部分图文】：

试验所用马缨杜鹃成年植株材料采集于金殿风景名胜区生长状态良好、花芽??发育正常的，树龄达５０年的马缨杜鹃植株（图１）；马缨杜鹃幼株材料取材于云南??省农业科学研宄院晋宁大春禾试验基地栽培的３年生盆栽马缨杜鹃植株（图２）。??麵??图１．马缨杜鹃成年植株??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ａｄｕｌｔ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??嘗??图２．马缨杜鹃盆栽幼株??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｙｏｕｎｇ?ｐｏｔｔｅｄ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??１０??

２．１．１植物材料??试验所用马缨杜鹃成年植株材料采集于金殿风景名胜区生长状态良好、花芽??发育正常的，树龄达５０年的马缨杜鹃植株（图１）；马缨杜鹃幼株材料取材于云南??省农业科学研宄院晋宁大春禾试验基地栽培的３年生盆栽马缨杜鹃植株（图２）。??麵??图１．马缨杜鹃成年植株??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ａｄｕｌｔ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??嘗??图２．马缨杜鹃盆栽幼株??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｙｏｕｎｇ?ｐｏｔｔｅｄ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??１０??

第三章结果分析??３．１马缨杜鹃总ＲＮＡ的提取??从ＲＮＡ条带的完整性来看，１％琼脂糖凝胶电泳结果显示（图３）：所提取马??缨杜鹃总ＲＮＡ的１８Ｓ与２８Ｓ两条带明亮清晰，无弥散、拖尾现象，且２８Ｓ条带的??亮度是１８Ｓ条带亮度的两倍，说明所提取ＲＮＡ完整性较好，无降解；从ＲＮＡ的??纯度与浓度来看，经超微量紫外分光光度计ＮＤ２０００检测结果显示，马缨杜鹃总??ＲＮＡ的浓度均在４００？９００ｎｇ／ｎＬ之间，ＯＤ２６?０／２８０的比值在１．８？２．０之间，说明??ＲＮＡ没有蛋白质、ＤＮＡ等污染。综合ＲＮＡ的完整性与纯、浓度结果来看，所提??取ＲＮＡ可用于后续的检测。??Ｍ?１?２??１０００?ｂｐ?—＾??７５０?ｂｐ???５００?ｂｐ????图３．?ＫＮＡ琼脂糖凝胶电泳图??（注：Ｍ：ＯＤ２０（＞０?ＤＩＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；丨￣２?为部分马缨杜鹃?ＲＮＡ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ＲＮＡ??Ｎｏｔｅ：?Ｍ：?ＯＤ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１?？２?ｉｓ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｖ？．办／ａｖ，“ｊ，／??３．２引物扩增效率及扩增特异性检测??３．２．１候选内参基因与干旱响应基因引物的扩增效率检测??经实时荧光定量ＰＣＲ检测后，如表３所示：各候选内参基因的扩增效率均在??９４?％?￣?１０６?％之间
【参考文献】

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1 汪蓉;叶向斌;岳保超;刘黾;管璞怡;;外源抗热剂对马缨杜鹃抗热性的影响初探[J];广东园林;2015年06期

2 纵丹;员涛;李佳蔓;周安佩;胡世俊;何承忠;;马缨杜鹃不同完整性居群遗传多样性的AFLP分析[J];中南林业科技大学学报;2014年09期

3 张玉芳;赵丽娟;曾幼玲;;基因表达研究中内参基因的选择与应用[J];植物生理学报;2014年08期

4 肖政;李纪元;范正琪;殷恒福;;荔波连蕊茶肌动蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达分析[J];林业科学研究;2014年03期

5 何永明;曾晓春;;开花期水稻颖花实时定量RT-PCR分析中内参基因的选择[J];江西农业大学学报;2012年06期

6 李晓艳;裴嘉博;张志东;吴林;刘海广;李海燕;李亚东;;越橘VcANS基因的克隆及表达分析[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2012年06期

7 孟玉平;曹秋芬;孙海峰;;枣树内参基因ZjH3的克隆与筛选[J];生物技术通报;2010年11期

8 洪鲲;张习敏;乙引;张冬林;陈训;高贵龙;;营养元素对马缨杜鹃花芽发育和花期的影响[J];北方园艺;2010年21期

9 孙美莲;王云生;杨冬青;韦朝领;高丽萍;夏涛;单育;骆洋;;茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J];植物学报;2010年05期

10 胡瑞波;范成明;傅永福;;植物实时荧光定量PCR内参基因的选择[J];中国农业科技导报;2009年06期

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5 张芳明;甜樱桃内参基因的筛选[D];河南农业大学;2013年

6 罗晓燕;桃microRNAs鉴定及内参基因的筛选[D];南京农业大学;2013年

本文编号：2842914