不同生长调节剂对蓝果忍冬组培和再生体系影响的研究

发布时间：2020-10-22 20:50

　　 以蓝果忍冬鲜食品种“邱雷姆”和“娜雷姆”为材料,以休眠芽萌发的带芽茎段为外植体,通过初代培养、继代增殖培养建立了组培快繁体系,以组培无菌苗的叶片、茎段为外植体,通过添加一种或多种生长调节剂诱导愈伤组织、诱导愈伤组织再生不定芽、诱导丛生芽生根建立离体植株再生体系,旨在为蓝果忍冬的苗木快繁、资源保存、生物技术育种等奠定基础。主要结果如下:(1)不同生长调节剂对两个品种增殖培养的影响不同,两品种适用的增殖培养基也不同,邱雷姆增殖系数较高的为处理2:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA,增殖系数为5.06,娜雷姆增殖系数较高的为处理7:3/4 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA增殖系数为5.3。(2)不同的生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导效果不同,单独添加2,4-D(0.5-2 mg/L)可有效诱导蓝果忍冬叶片产生愈伤组织,出愈率可达100%;单独添加6-BA和TDZ并不能诱导蓝果忍冬叶片产生愈伤组织;6-BA(1-2 mg/L)与2,4-D(0.2、0.5、1.0mg/L)配合使用可改善愈伤组织状态,使绿色致密型愈伤组织增加,愈伤量增多;添加6-BA、IBA、KT组合的三种生长调节剂,邱雷姆愈伤组织诱导率为60%-100%,娜雷姆诱导率稍低,为54%-95%,且愈伤量也表现为邱雷姆多余娜雷姆。三种添加方式相比较而言,6-BA与2,4-D组合诱导效果相对较好。(3)6-BA、IBA、KT三种生长调节剂中,IBA对两个品系茎段愈伤组织诱导都有显著影响,KT对娜雷姆茎段愈伤诱导有显著影响,对邱雷姆茎段愈伤诱导无显著影响,对邱雷姆而言,6-BA比KT的影响力大,6-BA和KT的F值分别为10.188和3.245。对娜雷姆而言,KT比6-BA的作用大,6-BA和KT的F值分别为20.663和33.027。娜雷姆茎段愈伤诱导培养为:MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+KT 1.0 mg/L,诱导率为77%,邱雷姆的茎段愈伤组织诱导培养基为:MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 0.5 mg/L诱导率为98%。(4)6-BA、IBA、KT组合诱导愈伤组织时,两品种叶片诱导率大于茎段诱导率,叶片愈伤量小于茎段愈伤量,邱雷姆茎段诱导率为49%-98%,叶片诱导率为60%-100%,娜雷姆茎段诱导率为1%-77%,叶片诱导率为54%-95%。茎段和叶片都适合做诱导愈伤组织的外植体,邱雷姆的诱导效果好于娜雷姆。(5)细胞分裂素类在蓝果忍冬愈伤组织的再生过程中发挥主导作用,生长素类起辅助作用,邱雷姆KT的芽诱导效果显著,好于6-BA,娜雷姆6-BA的诱导效果显著,好于KT。邱雷姆KT、6-BA、IBA的F值依次为3.512(p0.05)、2.681(p0.05)、0.265(p0.05),娜雷姆KT、6-BA、IBA的F值依次为7.421(p0.01)、9.052(p0.01)、2.755(p0.05)。两品种愈伤组织芽诱导培养基均可用MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L,邱雷姆和娜雷姆不定芽再生频率分别为83%和99%。(6)基本培养基和IBA是诱导生根的主导因素,且基本培养基的影响力大于IBA,NAA为次要因素。邱雷姆生根可选3/4 MS+0.5 mg/L IBA,娜雷姆生根可选:3/4 MS+1.0mg/L IBA。(7)适宜的暗处理时间可以缩短愈伤启动的时间,加快愈伤组织的生长。两品系合适的暗处理时间均为15天。
【学位单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S663.9
【部分图文】：

结果与分析.1 生长调节剂对蓝果忍冬组培快繁的影响.1.1 初代培养经过 75%乙醇浸泡 30 s（不时摇晃）→无菌水冲洗 3 次→0.1% HgCl2浸泡 6 min（不摇晃）→无菌水冲洗 6 次灭菌后，两品种的污染率都很低或几乎没有污染。将两个品种带芽茎段接种在 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA 培养基上培养 8 天左右，腋芽开始萌，叶片开始张开（见图 3-1-A）。初代培养一个月后两个品种的无菌苗都长势良好，出大量增殖（图 3-1-C）。图 3-1 展示了从接种到增殖的情况，说明邱雷姆，娜雷姆适用于献中[37]。MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA 的初代诱导培养基，分化率都为 100%，芽苗壮，数量充足，可为后面试验提供很好的试验材料。

水平显著差异，**表示 0.01 水平极显著差异,下同表 3-3 娜雷姆增殖系数方差分析Tab.3-3 The ANOVE analysis result of Proliferation coefficienseⅢ型平方和Type III Sum ofSquares自由度Degree offreedom均方Mean SquareF 值F value 1.48 2 0.74 18.579** 0.531 2 0.265 6.663** 0.894 2 0.447 11.222** 0.797 20 0.04579.169 27

图 3-7 愈伤组织再生Figure3-7 Callus regeneration 3 种生长调节剂对两品系的愈伤组织再生频率的影响来看，细组织的再生过程中发挥主导作用，生长素类起辅助作用，邱雷好于 6-BA，娜雷姆 6-BA 的诱导效果显著，好于 KT。两品种用 MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L，邱雷姆和娜 83%和 99%。调节剂及培养基对丛生芽生根的影响织产生的丛生芽切分后转入基本培养基、IBA、NAA 组合的 9养 30 天后观察统计结果见表 3-18。生根率不同，同一处理不同品种生根率也不同。影响邱雷姆生本培养基>NAA，影响娜雷姆生根率的主次因素为：基本培养基差分析结果发现，基本培养基和 IBA 是诱导生根的主导因素， IBA，NAA 为次要因素。NAA 对邱雷姆生根无显著影响（p>0雷姆生根（p<0.01）。根率均不太高（表 3-18），最高为邱雷姆处理 6 的 67%。娜雷
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本文编号：2852077