陕南侧耳属食用菌种质资源多样性研究及鲍鱼菇液体种发酵培养基优化

发布时间：2020-11-12 16:59

　　 侧耳属[Pleurotus(Fr.)Kumm]食用菌属木腐型菌类,易栽培、产量大,口感好、味道佳,营养丰富,具有较高的经济价值和食药用功效,与人类生活密切相关;鲍鱼菇(Pleurotus abalonus)系侧耳属食用菌主要品种之一,由于其生长条件和陕南气候相适应,已逐渐成为当地创收菌种,走向市场化道路。陕南食用菌种质资源丰富,作为主栽品种的侧耳属食用菌更是物种繁多,但普遍存在种名混乱现象。研究陕南侧耳属食用菌种质资源多样性,可有效避免种名混乱,同时为其种质资源库的建立和优良菌种的选育奠定基础;优化侧耳属鲍鱼菇液体种发酵培养基,可为陕南跨区域引进鲍鱼菇菌种的液体发酵培养和中试生产提供理论参考,以期扩大新菌种栽培量、提高产量。本研究首次以陕南35株侧耳属食用菌主栽菌种为试材,基于生物学特性、拮抗反应、酯酶同工酶和ITS序列综合研究了陕南侧耳属食用菌种质资源多样性;对陕南侧耳属鲍鱼菇液体种发酵培养基进行响应面优化,确定其最佳组合。研究结果如下:1.陕南侧耳属食用菌生物学特性研究为研究陕南侧耳属食用菌生物学特性,收集并考察了35株供试菌种的农学性状,采用组织培养法和栽培试验研究其菌落形态、液体种形态、子实体形态、生长发育情况和拮抗反应。结果表明:35株供试菌种的菌落形态、色泽、浓密程度和生长速度,液体种形态、色泽、大小、密度和发酵液颜色,子实体形态、色泽、产量和生长发育情况,栽培方式、出菇温度、温型、抗杂性和速生性均表现出丰富的生物多样性;根据固体培养条件下的菌丝色泽可将其分为5类、根据拮抗反应程度可分为4类;子实体形态特征可明显区分出菌种C23(淡红色扇形菌盖)、C27(黄色漏斗形菌盖)和C29(淡黄色小半球形菌盖);菌种C4的菌丝体、子实体生长速度快,液体种颗粒小、密度高,生物转化率高,抗杂性强,栽培优势显著。2.陕南侧耳属食用菌遗传多样性研究为研究陕南侧耳属食用菌遗传多样性,采用酯酶同工酶技术、ITS序列分析,构建了酶谱的相似系数表和聚类图以及ITS序列的遗传距离表和系统发育树,同时结合生物学特性,明确了供试菌种的生物学种名和亲缘关系。结果表明:35株供试菌种中有9株佛罗里达侧耳(Pleurotus floridanus),8株刺芹侧耳(Pleurotus eryngii),7株糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus),6株美味侧耳(Pleurotus sapidus),1株白灵侧耳(Pleurotus nebrodensis),1株鲍鱼侧耳(Pleurotus abalonus),1株桃红侧耳(Pleurotus salmoneostramineus),1株金顶侧耳(Pleurotus citrinopileatus),1株金针菇(Flammulina velutipes)(非侧耳属);菌种C2和C11、C17和C18、C19和C20、C21和C25为同种异名,菌种C23、C27和C28为种名不一。3.陕南侧耳属之鲍鱼菇液体种发酵培养基优化以陕南跨区域引进的侧耳属鲍鱼菇菌丝生物量为主要指标,采用Plackett-Burman试验和最陡爬坡试验确定响应因素与水平,Box-Benhnken响应曲面法优化得到鲍鱼菇液体种发酵培养基最佳组合(g/L):马铃薯240.00、葡萄糖30.00、玉米粉15.00、蛋白胨5.00、KH2PO4 3.00、MgSO4·7H2O 2.00、VB1 0.10,水1 L,pH自然。优化后的鲍鱼菇菌丝球颗粒小、密度高,生物量干重实测值为15.126 g/L,相比初始条件下的菌丝生物量干重实测值提高了17.92%。
【学位单位】：陕西理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S646
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 文献综述
    1.1 侧耳属食用菌概述
        1.1.1 侧耳属食用菌生物学特性
        1.1.2 侧耳属食用菌生活史
        1.1.3 侧耳属食用菌食（药）用价值
        1.1.4 侧耳属食用菌发展前景
    1.2 陕南食用菌发展现状
        1.2.1 环境条件
        1.2.2 陕南食用菌物种概况
        1.2.3 陕南食用菌产业现状
    1.3 食用菌种质资源研究方法
        1.3.1 生物学特性研究方法
        1.3.2 同工酶研究方法
        1.3.3 DNA分子研究方法
    1.4 食用菌液体发酵技术研究进展
        1.4.1 原理及特点
        1.4.2 发展现状
    1.5 研究背景及内容
        1.5.1 研究背景
        1.5.2 研究内容
第2章 陕南侧耳属食用菌生物学特性研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 供试菌种及来源
        2.1.2 培养基配方
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 菌种活化
        2.2.2 菌落形态特征及生长速度
        2.2.3 液体种形态特征
        2.2.4 拮抗反应
        2.2.5 子实体形态特征及生长情况
        2.2.6 农学性状调查
    2.3 结果与分析
        2.3.1 菌落形态特征及生长速度
        2.3.2 液体种形态特征
        2.3.3 拮抗反应
        2.3.4 子实体形态特征及生长情况
        2.3.5 供试菌种农学性状
    2.4 讨论
第3章 陕南侧耳属食用菌遗传多样性研究
    3.1 试验材料
        3.1.1 供试菌种信息
        3.1.2 培养基配方
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 仪器设备
    3.2 试验方法
        3.2.1 菌种活化
        3.2.2 酯酶同工酶提取及检测
        3.2.3 基因组DNA提取及检测
        3.2.4 ITS序列扩增及分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 酯酶同工酶酶谱分析
        3.3.2 酯酶同工酶酶谱聚类分析
        3.3.3 ITS序列电泳图谱分析
        3.3.4 ITS序列信息及遗传距离
        3.3.5 基于ITS序列构建系统发育树
    3.4 讨论
        3.4.1 酯酶同工酶结果讨论
        3.4.2 ITS序列分析结果讨论
        3.4.3 供试菌种的亲缘关系讨论
第4章 陕南侧耳属之鲍鱼菇液体种发酵培养基优化
    4.1 试验材料
        4.1.1 供试菌种
        4.1.2 培养基配方
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 仪器设备
    4.2 试验方法
        4.2.1 菌种活化
        4.2.2 液体种的制备
        4.2.3 鲍鱼菇菌丝生物量的测定
        4.2.4 Plackett-Burman设计试验
        4.2.5 最陡爬坡试验
        4.2.6 Box-Behnken试验设计
        4.2.7 数据分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 Plackett-Burman试验结果
        4.3.2 最陡爬坡试验
        4.3.3 Box-Benhnken试验结果
        4.3.4 Box-Benhnken试验方差分析
        4.3.5 响应面图形分析
        4.3.6 试验验证
    4.4 讨论
结论
参考文献
附录
攻读硕士学位期间学术成果
致谢

【参考文献】

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本文编号：2880999