柑橘易感溃疡病基因CsLOB1功能的研究
发布时间：2020-12-04 11:30
柑橘溃疡病是一种分布广泛,破坏严重的柑橘细菌性病害。该病害病原主要通过气孔和微伤口进行侵染,能够侵染多个柑橘品种并造成果实,叶片和茎产生坏死性溃疡病斑,严重影响柑橘品质和产量,给柑橘产业带来巨大经济损失。引起柑橘溃疡病的病原为柑橘黄单胞菌柑橘亚种（Xanthomonas citri ssp.citri,简称Xcc）,其III型分泌系统中的转录激活类（Transcription activator-like,TAL）效应因子PthA4被证明对柑橘溃疡病的病斑形成和细菌致病性有重要作用,如将该效应因子敲除会导致病原菌无法在侵染部位形成病斑。PthA4效应因子在进入植物体后会直接靶向调控基因启动子区内的效应因子结合位点（Effector binding elements,EBEs）。当比较叶片接菌Xcc306和PthA4缺失突变体（Xcc306?pthA4）后基因的变化情况发现,PthA4主要通过调控植物细胞壁修改、DNA包装及细胞分裂等基因来诱发植物产生病斑。通过DNA微阵列（Microarray）数据分析和EBEs预测等多种手段,最终发现柑橘侧生器官边界基因（Citrus lateral...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PthA4调控基因的GO分析
5. CsLOB1 诱导基因的检测和分析2.6 实验计划路线图图2.6 实验计划路线图Figure 2.6 The flowchart of experiments
启动子/T7 终止子测序引物进行验证发现，测序序列与 PthA4 在 NCBI 登记序列一致，表明获得预期载体，命名为 PET28a-PthA4-PE。图3.2 载体PET28a-PthA4-PE的酶切验证1,3：PET28a-PthA4-PE载体质粒；2,4: PET28a-PthA4-PE载体质粒经NdeI和EcoRI双酶切验证；M:1Kb plus梯度DNA标准分子量Figure 3.2 PET28a-PthA4-PE vector was confirmed by restricted enzyme digestion1,3：PET28a-PthA4-PE vector plasmid; 2,4: PET28a-PthA4-PE vector plasmid was digested with NdeI and EcoRIM：1Kb plus DNAladder转入感受态细胞 JM109 的 pET28a-PthA4-PE 菌株进行菌液培养，经试剂盒纯化回收获得 PET28a-PthA4-PE 重组质粒，将该质粒转化入表达株感受态BL21(DE3)。转化后的菌株在加有卡那霉素的 LB 液体培养基内过夜培养，次日利用新鲜菌液进行再次培养，培养至OD600=0.3左右时加入终浓度为1mM的IPTG，150rpm，30 ℃条件下培养 5h。诱导表达后的蛋白经蛋白纯化试剂盒 NTP-Ni 过柱纯化，再经 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行验证。结果显示
【参考文献】：
期刊论文
[1]柑桔溃疡病防治药剂的筛选研究[J]. 姚廷山,周常勇,胡军华,雷慧德,冉春,李鸿筠,刘浩强,肖田. 云南农业大学学报(自然科学版). 2011(01)
[2]柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究[J]. 陈力,王中康,黄冠军,曹月青,夏玉先,殷幼平. 中国农业科学. 2008(08)
[3]柑橘溃疡病发生与抗性研究进展[J]. 何秀玲,袁红旭. 中国农学通报. 2007(08)
[4]柑橘溃疡病综合治理技术探讨[J]. 夏建平,夏建美,夏建红,周大方. 中国植保导刊. 2006(08)
[5]柑桔溃疡病生防细菌Bt8的研究[J]. 谭小艳,黄思良,任建国,晏卫红,岑贞陆. 微生物学报. 2006(02)
[6]柑橘溃疡病防治技术[J]. 严秀琪. 安徽林业. 2005(05)
[7]柑桔溃疡病菌PCR快速检验检疫技术研究[J]. 王中康,孙宪昀,夏玉先,周常勇,殷幼平. 植物病理学报. 2004(01)
[8]克菌康防治柑橘溃疡病的效果试验[J]. 王洪祥,林荷芳,梁克宏. 浙江柑桔. 2003(04)
[9]柑桔溃疡病生物防治研究[J]. 周吉奎,罗宽,肖启明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2001(04)
[10]柑桔溃疡病的生物防治前景探讨[J]. 黄凤莲. 湖南农业科学. 2001(04)
本文编号：2897525
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PthA4调控基因的GO分析
5. CsLOB1 诱导基因的检测和分析2.6 实验计划路线图图2.6 实验计划路线图Figure 2.6 The flowchart of experiments
启动子/T7 终止子测序引物进行验证发现，测序序列与 PthA4 在 NCBI 登记序列一致，表明获得预期载体，命名为 PET28a-PthA4-PE。图3.2 载体PET28a-PthA4-PE的酶切验证1,3：PET28a-PthA4-PE载体质粒；2,4: PET28a-PthA4-PE载体质粒经NdeI和EcoRI双酶切验证；M:1Kb plus梯度DNA标准分子量Figure 3.2 PET28a-PthA4-PE vector was confirmed by restricted enzyme digestion1,3：PET28a-PthA4-PE vector plasmid; 2,4: PET28a-PthA4-PE vector plasmid was digested with NdeI and EcoRIM：1Kb plus DNAladder转入感受态细胞 JM109 的 pET28a-PthA4-PE 菌株进行菌液培养，经试剂盒纯化回收获得 PET28a-PthA4-PE 重组质粒，将该质粒转化入表达株感受态BL21(DE3)。转化后的菌株在加有卡那霉素的 LB 液体培养基内过夜培养，次日利用新鲜菌液进行再次培养，培养至OD600=0.3左右时加入终浓度为1mM的IPTG，150rpm，30 ℃条件下培养 5h。诱导表达后的蛋白经蛋白纯化试剂盒 NTP-Ni 过柱纯化，再经 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行验证。结果显示
【参考文献】：
期刊论文
[1]柑桔溃疡病防治药剂的筛选研究[J]. 姚廷山,周常勇,胡军华,雷慧德,冉春,李鸿筠,刘浩强,肖田. 云南农业大学学报(自然科学版). 2011(01)
[2]柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究[J]. 陈力,王中康,黄冠军,曹月青,夏玉先,殷幼平. 中国农业科学. 2008(08)
[3]柑橘溃疡病发生与抗性研究进展[J]. 何秀玲,袁红旭. 中国农学通报. 2007(08)
[4]柑橘溃疡病综合治理技术探讨[J]. 夏建平,夏建美,夏建红,周大方. 中国植保导刊. 2006(08)
[5]柑桔溃疡病生防细菌Bt8的研究[J]. 谭小艳,黄思良,任建国,晏卫红,岑贞陆. 微生物学报. 2006(02)
[6]柑橘溃疡病防治技术[J]. 严秀琪. 安徽林业. 2005(05)
[7]柑桔溃疡病菌PCR快速检验检疫技术研究[J]. 王中康,孙宪昀,夏玉先,周常勇,殷幼平. 植物病理学报. 2004(01)
[8]克菌康防治柑橘溃疡病的效果试验[J]. 王洪祥,林荷芳,梁克宏. 浙江柑桔. 2003(04)
[9]柑桔溃疡病生物防治研究[J]. 周吉奎,罗宽,肖启明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2001(04)
[10]柑桔溃疡病的生物防治前景探讨[J]. 黄凤莲. 湖南农业科学. 2001(04)
本文编号：2897525
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