高质量桃线粒体DNA提取技术体系的建立及线粒体基因组测序
发布时间：2020-12-04 11:17
线粒体为植物体内各项生命活动提供能量,其DNA编码植物体内一些重要酶类和蛋白质。提取高质量的线粒体DNA是线粒体基因组测序的重要前提。本研究以‘21世纪’、‘珲春’、‘早霞露’、‘中华寿桃’、‘Mafirm’、‘瑞光21’6个品种的桃叶片作为外植体,24℃完全避光条件下进行了愈伤组织诱导及增殖。并以获得的‘21世纪’桃愈伤组织为材料,通过匀浆化处理、差速离心和蔗糖衬垫等操作提取并纯化线粒体、利用SDS裂解法等方法提取并纯化mtDNA,最终获得了满足测序要求的‘21世纪’桃mtDNA,建立了一套适合桃的简便快速高效的mtDNA提取技术体系,丰富了蔷薇科果树mtDNA提取的研究。对‘21世纪’桃线粒体基因组进行了测序,初步分析了桃线粒体基因组的特点和基因的功能,为后续开展更广泛、更深入的研究奠定了基础。主要结果如下:1.MS培养基中同时添加6-BA和2,4-D可显著提高6个桃品种愈伤组织的诱导率,缩短诱导时间。当6-BA浓度达到3 mg/L时,诱导率可达到100%,愈伤组织的生长情况良好。最佳愈伤组织诱导培养基为MS+3.0 mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D。2.荧光显微镜检测显...
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
‘21世纪’桃愈伤组织生长情况
图 2-2 20 g 新鲜愈伤组织量Figure 2-2 Fresh callus (20g)泛应用于各类研究中。依据不同数桃组织培养的研究都集中在砧用茎段和种胚，关于以叶片为材则尝试着以新采集桃叶片为外植定芽作为外植体有如下几个优点或不定芽作为材料诱导愈伤组织体诱导愈伤组织可以省略不定芽较多，其各个缝隙间极易因消毒点，在正确进行消毒操作的基础而言，获得材料本身限制较多，
3-1 两次独立试验捕捉到的线粒体荧光显微镜观ndrial fluorescence microscopic observations capturexperiments取结果分析紫外吸收光度分析NA 经 Bio-Drop 超微量蛋白核酸分析仪测 A260/A280 均介于 1.8~2.0，说明不含蛋白 2，说明不含有机盐等杂质，该提取方法提表 3-3 mtDNA 浓度及紫外吸光度分析 Concentration and ultraviolet absorption spectrop1 2 3 4 921.5 1457.8 1486.3 1216.5
【参考文献】：
期刊论文
[1]茄科植物线粒体基因组学研究进展[J]. 王如意,蔡训辉,范彦君,胡胜男,周玮. 基因组学与应用生物学. 2019(12)
[2]植物雄性不育的机制及应用研究进展[J]. 王保明,陈永忠,李红波,莫华,黄露波. 河南农业科学. 2019(05)
[3]核桃CBF基因在低温胁迫中表达[J]. 宋静武,彭磊. 湖北林业科技. 2019(02)
[4]石榴冻害及抗寒评价研究进展[J]. 焦其庆,冯立娟,尹燕雷,崔洪涛. 植物生理学报. 2019(04)
[5]观赏桃品种‘嫣粉娇香’的选育[J]. 岳长平,汪世忠,张应照,王珂,马朝,徐如仕. 中国果树. 2019(02)
[6]桃种质资源收集利用及进化研究进展[J]. 雷培,尹泽超,桑利群,关法春,王玉婷,孟凡娟. 现代农业科技. 2019(01)
[7]观赏桃新品种‘美慧’[J]. 胡丁猛,许景伟,囤兴建,王立辉,朱升祥. 园艺学报. 2018(S2)
[8]桃果肉颜色形成机制研究进展[J]. 张颖,刘璐琪,殷亚蕊,武军凯,张立彬. 河北果树. 2018(06)
[9]植物线粒体抗氧化应激效应影响的研究进展[J]. 曾德永,崔杰,张萌,关双红,高鑫,山珊,刘梦瑶,孙野青,卢卫红. 江苏农业科学. 2018(21)
[10]植物CMS不育基因的研究进展[J]. 杨慧丽,杨露,张怀胜,林亚楠,李冰,薛亚东. 广东农业科学. 2018(10)
博士论文
[1]葡萄种质资源抗寒性评价及抗寒候选基因挖掘[D]. 柴风梅.中国科学院大学(中国科学院武汉植物园) 2018
[2]棉花线粒体基因组的测序和序列初步分析[D]. 苏爱国.中国农业大学 2013
[3]棉花线粒体基因组测序及其细胞质雄性不育机理的初步研究[D]. 李双双.中国农业大学 2013
[4]白桦低温胁迫响应与叶绿体RNA结合蛋白的蛋白质组学研究[D]. 乌凤章.东北林业大学 2008
硕士论文
[1]桃种质资源多酚类物质评价及其QTL定位[D]. 丁体玉.中国农业科学院 2017
[2]桃线粒体DNA多态性及其与抗寒性的关系[D]. 赵慧敏.河北科技师范学院 2013
[3]不同抗寒/冻性葡萄CBF2基因克隆分析及表达载体构建[D]. 张哲敏.甘肃农业大学 2012
[4]根癌农杆菌介导的抗寒基因转录因子CBF转化苹果的研究[D]. 杨丽丽.河北农业大学 2006
本文编号：2897506
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
‘21世纪’桃愈伤组织生长情况
图 2-2 20 g 新鲜愈伤组织量Figure 2-2 Fresh callus (20g)泛应用于各类研究中。依据不同数桃组织培养的研究都集中在砧用茎段和种胚，关于以叶片为材则尝试着以新采集桃叶片为外植定芽作为外植体有如下几个优点或不定芽作为材料诱导愈伤组织体诱导愈伤组织可以省略不定芽较多，其各个缝隙间极易因消毒点，在正确进行消毒操作的基础而言，获得材料本身限制较多，
3-1 两次独立试验捕捉到的线粒体荧光显微镜观ndrial fluorescence microscopic observations capturexperiments取结果分析紫外吸收光度分析NA 经 Bio-Drop 超微量蛋白核酸分析仪测 A260/A280 均介于 1.8~2.0，说明不含蛋白 2，说明不含有机盐等杂质，该提取方法提表 3-3 mtDNA 浓度及紫外吸光度分析 Concentration and ultraviolet absorption spectrop1 2 3 4 921.5 1457.8 1486.3 1216.5
【参考文献】：
期刊论文
[1]茄科植物线粒体基因组学研究进展[J]. 王如意,蔡训辉,范彦君,胡胜男,周玮. 基因组学与应用生物学. 2019(12)
[2]植物雄性不育的机制及应用研究进展[J]. 王保明,陈永忠,李红波,莫华,黄露波. 河南农业科学. 2019(05)
[3]核桃CBF基因在低温胁迫中表达[J]. 宋静武,彭磊. 湖北林业科技. 2019(02)
[4]石榴冻害及抗寒评价研究进展[J]. 焦其庆,冯立娟,尹燕雷,崔洪涛. 植物生理学报. 2019(04)
[5]观赏桃品种‘嫣粉娇香’的选育[J]. 岳长平,汪世忠,张应照,王珂,马朝,徐如仕. 中国果树. 2019(02)
[6]桃种质资源收集利用及进化研究进展[J]. 雷培,尹泽超,桑利群,关法春,王玉婷,孟凡娟. 现代农业科技. 2019(01)
[7]观赏桃新品种‘美慧’[J]. 胡丁猛,许景伟,囤兴建,王立辉,朱升祥. 园艺学报. 2018(S2)
[8]桃果肉颜色形成机制研究进展[J]. 张颖,刘璐琪,殷亚蕊,武军凯,张立彬. 河北果树. 2018(06)
[9]植物线粒体抗氧化应激效应影响的研究进展[J]. 曾德永,崔杰,张萌,关双红,高鑫,山珊,刘梦瑶,孙野青,卢卫红. 江苏农业科学. 2018(21)
[10]植物CMS不育基因的研究进展[J]. 杨慧丽,杨露,张怀胜,林亚楠,李冰,薛亚东. 广东农业科学. 2018(10)
博士论文
[1]葡萄种质资源抗寒性评价及抗寒候选基因挖掘[D]. 柴风梅.中国科学院大学(中国科学院武汉植物园) 2018
[2]棉花线粒体基因组的测序和序列初步分析[D]. 苏爱国.中国农业大学 2013
[3]棉花线粒体基因组测序及其细胞质雄性不育机理的初步研究[D]. 李双双.中国农业大学 2013
[4]白桦低温胁迫响应与叶绿体RNA结合蛋白的蛋白质组学研究[D]. 乌凤章.东北林业大学 2008
硕士论文
[1]桃种质资源多酚类物质评价及其QTL定位[D]. 丁体玉.中国农业科学院 2017
[2]桃线粒体DNA多态性及其与抗寒性的关系[D]. 赵慧敏.河北科技师范学院 2013
[3]不同抗寒/冻性葡萄CBF2基因克隆分析及表达载体构建[D]. 张哲敏.甘肃农业大学 2012
[4]根癌农杆菌介导的抗寒基因转录因子CBF转化苹果的研究[D]. 杨丽丽.河北农业大学 2006
本文编号：2897506
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