芍药DELLA蛋白PlGAl1基因启动子的克隆及功能初步分析
发布时间：2020-12-15 02:31
芍药（Paeoniaa lactiflora Pall.）为多年生宿根草本观赏花卉,也是东北地区重要的园林绿化植物。但芍药种子具有典型的上、下胚轴双重休眠的特性,生长周期长达半年之久,所以在种子繁殖过程中常常因不能打破休眠而造成萌发率低,严重影响其繁种生产。赤霉素（GA）作为植物体内最重要的激素,对芍药种子萌发和下胚轴伸长有促进作用,使作为赤霉素转录因子的DELLA蛋白家族基因PlGAl1在芍药种子萌发过程中作用突出,而PlGAl1基因启动子调控着基因的转录表达。本研究以芍药杂交后的子代种子（♀粉玉奴×♂粉玉楼）为材料,在已获得的与芍药休眠萌发相关的DELLA蛋白PlGAl1基因的cDNA 1872 bp全长序列的基础上,利用染色体步移技术,成功克隆出芍药DELLA蛋白PlGAl1基因861 bp的启动子序列。主要的实验结果如下:1.芍药不同组织所提取DNA的质量有所不同,用Nanodrop 2000微量分光光度计对所获得的基因组DNA进行浓度、产量及PCR扩增检测,结果表明,从7种组织获得的基因组DNA中,种子、组培苗叶片、成熟叶片的OD260/OD280值在1.80-1.90之间,...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 高等植物启动子研究进展
1.1.1 植物启动子基本特征
1.1.2 植物启动子类型
1.1.3 植物启动子的克隆方法
1.2 植物种子特异性启动子的研究进展
1.3 DELLA蛋白基因启动子的研究进展
1.4 本研究的目的与意义
1.5 本研究的技术路线
第二章 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子的克隆及序列预测
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株与克隆载体
2.1.3 试验试剂
2.1.4 常用试剂及培养基的配制方法
2.1.5 主要试验仪器及生物分析软件
2.2 试验方法
2.2.1 芍药基因组DNA的提取
2.2.2 芍药不同组织基因组DNA提取质量的比较
2.2.3 染色体步移扩增DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列
2.2.4 DELLA蛋白PlGAl1基因5'调控区序列的测定
2.3 结果与分析
2.3.1 芍药不同组织基因组DNA提取质量比较
2.3.2 染色体步移扩增DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列
2.3.3 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列分析及功能预测
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 DELLA蛋白PlGAl1基因表达载体构建及农杆菌转化
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株与克隆载体
3.1.3 试验试剂
3.1.4 常用培养基的配制方法
3.1.5 主要试验仪器
3.1.6 常用生物软件
3.2 试验方法
3.2.1 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子片段的获得
3.2.2 融合表达载体的构建
3.2.3 重组质粒导入农杆菌
3.3 结果与分析
3.3.1 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子片段的获得
3.3.2 启动子片段和表达载体pCAMBIA1301的酶切处理结果
3.3.3 重组表达载体的构建及检测
3.3.4 重组农杆菌的鉴定
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子的类型及应用[J]. 贺飞燕,闫建俊,白云凤,冯瑞云,施俊凤. 山西农业科学. 2017(01)
[2]甘蓝AP2/ERF转录因子的克隆和生物信息学分析[J]. 郭慧,金司阳,刘寒,王振月. 中国药师. 2017(01)
[3]小麦查尔酮合成酶基因及其启动子序列的克隆与分析[J]. 薛保国,谢丽华,杨丽荣,孙润红,全鑫,杨艳艳,孙虎,雷振生,赵献林. 植物病理学报. 2017(01)
[4]芍药基因组DNA不同提取方法的比较及PCR验证[J]. 王小国. 现代园艺. 2016(18)
[5]不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果[J]. 王希,陈丽,赵春雷,丁广洲,贾海伦,徐杰. 中国糖料. 2016(04)
[6]梨休眠DELLA蛋白PpGAI基因的克隆与表达分析[J]. 刘杭,杨贺忠,李亮,王芳,吴少华,李永裕. 分子植物育种. 2016(08)
[7]植物miRNA启动子研究进展[J]. 陈敏,陈慧,包海,黄鹏,王延伟. 中国生物工程杂志. 2016(05)
[8]植物组织特异性启动子及相关顺式作用元件研究进展[J]. 李濯雪,陈信波. 生物学杂志. 2015(06)
[9]植物启动子研究进展[J]. 雒雅婧,李杰,张爽,杜克久. 北方园艺. 2015(22)
[10]植物诱导型启动子及相关顺式作用元件研究进展[J]. 李濯雪,陈信波. 生物技术通报. 2015(10)
博士论文
[1]桃PpERS1、PpADC基因克隆、鉴定及PtADC转基因功能分析[D]. 王保全.华中农业大学 2012
硕士论文
[1]芍药种子下胚轴休眠与萌发相关调控基因PlGAI1的克隆及功能分析[D]. 崔金秋.沈阳农业大学 2016
[2]岷江百合GPAT基因启动子的克隆与功能初步分析[D]. 汤湾.沈阳农业大学 2016
[3]芍药种子中α-亚麻酸生物合成相关基因的克隆与表达[D]. 姜瑶.扬州大学 2015
[4]葡萄βVPE基因启动子的克隆与功能分析[D]. 魏蓉.西北农林科技大学 2014
[5]强冬性小麦重结晶抑制蛋白基因启动子的分离与鉴定[D]. 姜跃.沈阳农业大学 2013
[6]亚洲棉种皮特异性启动子的克隆及表达载体构建[D]. 余道乾.中国农业科学院 2013
[7]银杏MECT、MECPs基因启动子克隆及植物表达载体构建[D]. 袁红慧.武汉工程大学 2013
[8]西瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶基因及启动子的克隆与分析[D]. 李萌.河北农业大学 2012
[9]枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）DELLA基因的克隆与分析[D]. 杨敏.西南大学 2011
[10]桃PG酶基因启动子克隆及序列分析[D]. 郭国宁.河南科技大学 2010
本文编号：2917481
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 高等植物启动子研究进展
1.1.1 植物启动子基本特征
1.1.2 植物启动子类型
1.1.3 植物启动子的克隆方法
1.2 植物种子特异性启动子的研究进展
1.3 DELLA蛋白基因启动子的研究进展
1.4 本研究的目的与意义
1.5 本研究的技术路线
第二章 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子的克隆及序列预测
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株与克隆载体
2.1.3 试验试剂
2.1.4 常用试剂及培养基的配制方法
2.1.5 主要试验仪器及生物分析软件
2.2 试验方法
2.2.1 芍药基因组DNA的提取
2.2.2 芍药不同组织基因组DNA提取质量的比较
2.2.3 染色体步移扩增DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列
2.2.4 DELLA蛋白PlGAl1基因5'调控区序列的测定
2.3 结果与分析
2.3.1 芍药不同组织基因组DNA提取质量比较
2.3.2 染色体步移扩增DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列
2.3.3 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子序列分析及功能预测
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 DELLA蛋白PlGAl1基因表达载体构建及农杆菌转化
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株与克隆载体
3.1.3 试验试剂
3.1.4 常用培养基的配制方法
3.1.5 主要试验仪器
3.1.6 常用生物软件
3.2 试验方法
3.2.1 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子片段的获得
3.2.2 融合表达载体的构建
3.2.3 重组质粒导入农杆菌
3.3 结果与分析
3.3.1 DELLA蛋白PlGAl1基因启动子片段的获得
3.3.2 启动子片段和表达载体pCAMBIA1301的酶切处理结果
3.3.3 重组表达载体的构建及检测
3.3.4 重组农杆菌的鉴定
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子的类型及应用[J]. 贺飞燕,闫建俊,白云凤,冯瑞云,施俊凤. 山西农业科学. 2017(01)
[2]甘蓝AP2/ERF转录因子的克隆和生物信息学分析[J]. 郭慧,金司阳,刘寒,王振月. 中国药师. 2017(01)
[3]小麦查尔酮合成酶基因及其启动子序列的克隆与分析[J]. 薛保国,谢丽华,杨丽荣,孙润红,全鑫,杨艳艳,孙虎,雷振生,赵献林. 植物病理学报. 2017(01)
[4]芍药基因组DNA不同提取方法的比较及PCR验证[J]. 王小国. 现代园艺. 2016(18)
[5]不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果[J]. 王希,陈丽,赵春雷,丁广洲,贾海伦,徐杰. 中国糖料. 2016(04)
[6]梨休眠DELLA蛋白PpGAI基因的克隆与表达分析[J]. 刘杭,杨贺忠,李亮,王芳,吴少华,李永裕. 分子植物育种. 2016(08)
[7]植物miRNA启动子研究进展[J]. 陈敏,陈慧,包海,黄鹏,王延伟. 中国生物工程杂志. 2016(05)
[8]植物组织特异性启动子及相关顺式作用元件研究进展[J]. 李濯雪,陈信波. 生物学杂志. 2015(06)
[9]植物启动子研究进展[J]. 雒雅婧,李杰,张爽,杜克久. 北方园艺. 2015(22)
[10]植物诱导型启动子及相关顺式作用元件研究进展[J]. 李濯雪,陈信波. 生物技术通报. 2015(10)
博士论文
[1]桃PpERS1、PpADC基因克隆、鉴定及PtADC转基因功能分析[D]. 王保全.华中农业大学 2012
硕士论文
[1]芍药种子下胚轴休眠与萌发相关调控基因PlGAI1的克隆及功能分析[D]. 崔金秋.沈阳农业大学 2016
[2]岷江百合GPAT基因启动子的克隆与功能初步分析[D]. 汤湾.沈阳农业大学 2016
[3]芍药种子中α-亚麻酸生物合成相关基因的克隆与表达[D]. 姜瑶.扬州大学 2015
[4]葡萄βVPE基因启动子的克隆与功能分析[D]. 魏蓉.西北农林科技大学 2014
[5]强冬性小麦重结晶抑制蛋白基因启动子的分离与鉴定[D]. 姜跃.沈阳农业大学 2013
[6]亚洲棉种皮特异性启动子的克隆及表达载体构建[D]. 余道乾.中国农业科学院 2013
[7]银杏MECT、MECPs基因启动子克隆及植物表达载体构建[D]. 袁红慧.武汉工程大学 2013
[8]西瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶基因及启动子的克隆与分析[D]. 李萌.河北农业大学 2012
[9]枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）DELLA基因的克隆与分析[D]. 杨敏.西南大学 2011
[10]桃PG酶基因启动子克隆及序列分析[D]. 郭国宁.河南科技大学 2010
本文编号：2917481
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