芒果炭疽病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD1与羟基萘还原酶基因THR1克隆与致病相关功能鉴定
发布时间：2021-01-12 10:35
芒果（Mangifera indica L.）是仅次于香蕉的热带、亚热带水果之一,由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.&Sacc）引起芒果炭疽病是为害芒果最严重的病害之一。关于该病害的研究,在病害症状、病原菌生物学、病害发生规律和防治方法等方面报道较多,但在致病机理及其致病性相关基因方面的报道较少。本实验研究了该菌为调控黑色素合成相关的两个致病基因小柱孢酮脱水酶SCD1基因和羟基萘还原酶基因THR1,在克隆获得了全长序列的基础上,通过插入gfp::hygB替换靶标基因的原理构建了敲除载体,通过转化原生质体、含hygB的SR平板筛选、特异性引物PCR验证获得SCD1基因和THR1基因各3个敲除突变体,测定了表型初步分析了其功能,这对揭示Cgloeosporioides. 的致病机理具有重要的学术价值,也为后续寻求防治该病害的新靶标打下良好的理论基础。主要结果如下:1.获得芒果炭疽病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD1全长DNA和cDNA序列参照橡胶树炭疽病菌HBCg01基因组数据,利用同源克隆策略技术,通过PCR和RT-PCR技术,获得S...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]桑椹菌核病菌（Scleromitrula shiraiana）黑色素生物合成相关基因的克隆与功能分析[J]. 康鑫,吕志远,黄艳,向仲怀,何宁佳. 植物病理学报. 2017(04)
[2]贵州山地芒果病虫害种类调查[J]. 黄海,彭杨,龚德勇,朱文华,吴小波. 热带农业科学. 2016(09)
[3]芒果炭疽病菌对果实主要品质的影响[J]. 李娇,张燕宁,张兰,顾晓军,蒋红云. 食品科技. 2016(03)
[4]芒果:果中神品[J]. 陆小鸿. 广西林业. 2015(09)
[5]海南省芒果畸形病的发现与鉴定[J]. 张贺,韦运谢,漆艳香,刘晓妹,谢艺贤,喻群芳,蒲金基. 热带作物学报. 2015(07)
[6]芒果病害综合防治技术[J]. 蒲金基,张贺,周文忠. 中国热带农业. 2015(03)
[7]芒果炭疽病防治技术研究进展[J]. 邵明英. 农家顾问. 2015(02)
[8]杧果炭疽菌拮抗细菌的筛选鉴定及其防病效果[J]. 潘朝勃,李其利,莫贱友,郭堂勋,黄穗萍,韦继光. 植物保护学报. 2013(06)
[9]橡胶树胶孢炭疽病菌致病相关基因CgATG8的功能分析[J]. 李超萍,林春花,翟李刚,时涛,黄贵修. 热带作物学报. 2013(11)
[10]我国芒果产业现状与发展策略[J]. 李日旺,黄国弟,苏美花,周俊岸,陈永森. 南方农业学报. 2013(05)
博士论文
[1]橡胶树胶孢炭疽菌突变体库的构建及其CgATPase基因功能分析[D]. 蔡志英.海南大学 2013
[2]玉米大斑病菌黑色素合成途径相关基因的克隆及功能分析[D]. 曹志艳.河北农业大学 2009
[3]调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的STK基因的克隆与功能分析[D]. 谷守芹.河北农业大学 2007
硕士论文
[1]芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1的克隆与致病相关功能鉴定[D]. 韦运谢.海南大学 2014
[2]杧果炭疽病菌对咪鲜胺的室内抗药性研究[D]. 王小琴.福建农林大学 2013
[3]玉米大斑病菌漆酶基因StLAC在黑色素合成中的功能分析[D]. 詹旭.河北农业大学 2011
[4]玉米大斑病菌黑色素合成酶基因4HNR的克隆与功能研究[D]. 温雷蕾.河北农业大学 2008
[5]胶孢炭疽菌侵染柿树的细胞学研究及CGTA1基因的克隆[D]. 李明江.浙江大学 2007
[6]筛选芒果采后炭疽病和蒂腐病的生防菌研究[D]. 何秀娟.华中农业大学 2006
[7]芒果炭疽菌遗传基础多态性研究[D]. 江华.华南热带农业大学 2004
本文编号：2972699
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２ｐＣＴ７４质粒结构图??Ｆｉ．２?ＰｌａｓｍｉｄｅＣＴ７４??
插入ｐＵＣ?１９载体的Ｔ－Ｃｌｏｎｉｎｇ克隆位点上，后转化￡■．〇？／／?ＤＨ?５ａ，筛选出阳性克??隆测序，将序列正确的克隆提取质粒、并用７０％的甘油保存，即完成了?ＳＣＤ／和??７７／及７基因敲除载体的构建（图３）。??５ＳＣＤ１?＋?ａｔｏ：：ｈｖａＢ?｜＾＞－ｆ?３ＳＣＤ１??ｌｎ－Ｆｕｓｉｏｎ？！ＨＤ?Ｃｌｏｎｉｎｇ?Ｋｉｔ??ｐＵＣ１９＂Ｔ?一｜?Ｔ－Ｃｌｏｎｉｎｇ?Ｓｉｔｅ?￣［—??ＰＡ２ＳＣＤ１ＧＨ?ｘｌ?丄?Ｋ?，＿，???［］５ＳＣＤ１?＜?Ｑｆｐ：：ｈｖ〇Ｂ?＞?３ＳＣＤ１?｜?｜???图３．?ＳＣＯ／基因敲除载体的构建策略（７７／７？／同）??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＳＣＤ１?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｃ．?ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ??（１）＞ＳＣＤ７基因５＇端和３＇端片段的扩增与回收??根据己获得的全长序列，设计引物，以Ａ２ｇＤＮＡ为模板，扩增靠近??ＳＣＤ］基因５＇端含启动子在内预期大小约５００ｂｐ的一段序列５ＳＣＤ１，同时扩增??靠近ＳＣＤ１基因３＇附近序列长３５０ｂｐ的一段序列３ＳＣＤ１。??引物序列如下：（边框部分序列为与ｐＵＣ１９载体同源的序列；单线部分与??片段同源的序列，下同）??基因５＇端扩增引物：??５ＳＣＤ１－ＭＦ：?５，?＾ＣＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＧＧＡＴ（＾?ＣＣＣＡＣＧＴＣＣＣＴＴＧＣＡＧＴＡ－３ｒ??５ＳＣＤ１－ＭＲ：?５
２．?１．２沉仍基因的ＤＮＡ、ｃＤＮＡ片段？广增及序列分析??（１）?■ＳＣＺＷ基因的ＤＮＡ片段扩增以胶胞炭疽菌Ａ２的总ＤＮＡ为模版，??用引物ＳＣＤ１Ｑ－Ｆ／Ｒ扩增获得了约１６００ｂｐ的片段（图６），测序表明大小为??１５８０ｂｐ；在ＮＣＢＩ?ＧｅｎｅＢａｎｋ中与已提交的基因序列进行Ｂｌａｓｔｎ相似性对比，结??果表明该序列与?Ｃ?ｃａｒ／ｃａｅ?（Ｇｅｎｂａｎｆｃ?ＧＱ２６６３８６．１＞?Ｃ．?／ｍｍ似（ＧＱ２６６３８９．１）及匸．??ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ?（Ｄ８６０７９．１）＾?Ｃ．ｃｏｃｃｏｄｅｓ?（ＧＱ２６６３Ｓ５＼＼ｙ?Ｃ．ｆｌｏｒｉｎｉａｅ?（ＬＸＭ００７５９２２８６．１）??的小柱孢酮脱水酶基因相似性依次达９７％、９８％、８９％、８９％、８７％，可见本实??验试验所获得的基因片段是预期的芒果炭疽菌小柱孢酮脱水酶基因沉：／）／，适合??进行下一步实验。??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]桑椹菌核病菌（Scleromitrula shiraiana）黑色素生物合成相关基因的克隆与功能分析[J]. 康鑫,吕志远,黄艳,向仲怀,何宁佳. 植物病理学报. 2017(04)
[2]贵州山地芒果病虫害种类调查[J]. 黄海,彭杨,龚德勇,朱文华,吴小波. 热带农业科学. 2016(09)
[3]芒果炭疽病菌对果实主要品质的影响[J]. 李娇,张燕宁,张兰,顾晓军,蒋红云. 食品科技. 2016(03)
[4]芒果:果中神品[J]. 陆小鸿. 广西林业. 2015(09)
[5]海南省芒果畸形病的发现与鉴定[J]. 张贺,韦运谢,漆艳香,刘晓妹,谢艺贤,喻群芳,蒲金基. 热带作物学报. 2015(07)
[6]芒果病害综合防治技术[J]. 蒲金基,张贺,周文忠. 中国热带农业. 2015(03)
[7]芒果炭疽病防治技术研究进展[J]. 邵明英. 农家顾问. 2015(02)
[8]杧果炭疽菌拮抗细菌的筛选鉴定及其防病效果[J]. 潘朝勃,李其利,莫贱友,郭堂勋,黄穗萍,韦继光. 植物保护学报. 2013(06)
[9]橡胶树胶孢炭疽病菌致病相关基因CgATG8的功能分析[J]. 李超萍,林春花,翟李刚,时涛,黄贵修. 热带作物学报. 2013(11)
[10]我国芒果产业现状与发展策略[J]. 李日旺,黄国弟,苏美花,周俊岸,陈永森. 南方农业学报. 2013(05)
博士论文
[1]橡胶树胶孢炭疽菌突变体库的构建及其CgATPase基因功能分析[D]. 蔡志英.海南大学 2013
[2]玉米大斑病菌黑色素合成途径相关基因的克隆及功能分析[D]. 曹志艳.河北农业大学 2009
[3]调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的STK基因的克隆与功能分析[D]. 谷守芹.河北农业大学 2007
硕士论文
[1]芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1的克隆与致病相关功能鉴定[D]. 韦运谢.海南大学 2014
[2]杧果炭疽病菌对咪鲜胺的室内抗药性研究[D]. 王小琴.福建农林大学 2013
[3]玉米大斑病菌漆酶基因StLAC在黑色素合成中的功能分析[D]. 詹旭.河北农业大学 2011
[4]玉米大斑病菌黑色素合成酶基因4HNR的克隆与功能研究[D]. 温雷蕾.河北农业大学 2008
[5]胶孢炭疽菌侵染柿树的细胞学研究及CGTA1基因的克隆[D]. 李明江.浙江大学 2007
[6]筛选芒果采后炭疽病和蒂腐病的生防菌研究[D]. 何秀娟.华中农业大学 2006
[7]芒果炭疽菌遗传基础多态性研究[D]. 江华.华南热带农业大学 2004
本文编号：2972699
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