基于MSAP标记的山核桃（Carya cathayensis Sarg.）甲基化研究

发布时间：2021-02-25 15:18

　　山核桃为浙江省重要的经济树种。近年来细胞生物学及分子标记的研究发现,山核桃中存在无融合生殖,天然群体的多态性不佳,存在iQTL（印迹数量性状位点）。印迹QTL与DNA甲基化有关,而DNA甲基化对生物表型起着重要的作用,是可遗传的生物现象。甲基化敏感扩增多态性（MSAP）是在AFLP技术基础上衍生的基于PCR扩增多态性的DNA甲基化检测方法。基于此,我们在山核桃中尝试MSAP标记,对山核桃甲基化进行了初步研究,研究结果如下:1、建立了适用于山核桃的MSAP分析体系,并对天然林中的山核桃进行了初步分析,将分析结果与山核桃AFLP、RAPD、ISSR、SRAP、SSR等分子标记结果进行了比较,发现山核桃MSAP分子标记的多态性水平（93.57%）最高。2、山核桃总甲基化相对水平和非甲基化相对水平分别为25.994±2.415%和33.381±3.657%,非甲基化相对水平大于总甲基化相对水平（p<0.001）;总甲基化中半甲基化相对水平和内侧胞嘧啶甲基化相对水平分别为7.892±1.525%和18.102±3.940%,内侧胞嘧啶甲基化相对水平远大于半甲基化相对水平（p<0.00... 

【文章来源】：浙江农林大学浙江省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 国内外相关研究进展
    1.1 山核桃遗传研究
        1.1.1 山核桃简介
        1.1.2 山核桃无融合生殖研究进展
    1.2 植物DNA甲基化的研究进展
        1.2.1 表观遗传学
        1.2.2 DNA甲基化的概念
        1.2.3 植物DNA甲基化模式的产生及维持机制
            1.2.3.1 植物DNA甲基转移酶
            1.2.3.2 DNA的甲基化及去甲基化机制
        1.2.4 植物DNA甲基化的生物学作用
            1.2.4.1 DNA甲基化与杂种优势
            1.2.4.2 DNA甲基化与亲本印记
        1.2.5 DNA甲基化的检测方法
            1.2.5.1 待检测样品的前期处理及目标序列的定位
            1.2.5.2 植物基因组DNA甲基化状态的检测
    1.3 MSAP技术及其在植物研究中的应用
        1.3.1 MSAP技术的原理
        1.3.2 MSAP技术的操作流程
        1.3.3 MSAP在植物研究中的应用
2 本文研究目的意义、内容与技术路线
    2.1 研究目的意义
    2.2 主要研究内容
    2.3 技术路线
3 基于MSAP标记的山核桃甲基化研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
            3.1.1.1 实验材料
            3.1.1.2 实验试剂
            3.1.1.3 实验仪器设备
        3.1.2 方法
            3.1.2.1 基因组DNA的提取
            3.1.2.2 山核桃MSAP分析体系的建立
            3.1.2.3 山核桃MSAP分析体系在美国山核桃上的应用
            3.1.2.4 MSAP分析
            3.1.2.5 山核桃多种分子标记分析的比较
            3.1.2.6 MSAP标记数据的分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 基因组DNA的提取
        3.2.2 山核桃MSAP体系的优化
            3.2.2.1 基因组DNA双酶切
            3.2.2.2 DNA预扩增
            3.2.2.3 山核桃基因组DNA选择性扩增
            3.2.2.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
            3.2.2.5 选择性扩增引物的筛选
        3.2.3 山核桃MSAP分析体系在美国山核桃上的应用
        3.2.4 山核桃甲基化水平分析
            3.2.4.1 山核桃亲本甲基化敏感多态性分析
            3.2.4.2 山核桃MSAP标记与其他标记分析结果的比较
            3.2.4.3 甲基化/非甲基化相对水平分析
            3.2.4.4 天然群体山核桃遗传和表观遗传多样性分析
            3.2.4.5 天然群体山核桃遗传与表观遗传分化及结构分析
        3.2.5 山核桃半同胞子代群体遗传和表观遗传多样性分析
            3.2.5.1 山核桃半同胞子代群体遗传和表观遗传多样性分析
            3.2.5.2 山核桃半同胞子代群体遗传与表观遗传分化
        3.2.6 亲子代群体遗传与表观遗传多样性比较
    3.3 讨论
4 结论
参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物DNA甲基化调控研究进展[J]. 马浪浪,江舟,黄小波,沈亚欧,潘光堂.  中国生物工程杂志. 2013(09)
[2]植物DNA甲基化研究进展[J]. 李娜,张旸,解莉楠,李玉花.  植物生理学报. 2012(11)
[3]泡桐MSAP体系建立及引物筛选[J]. 曹喜兵,赵改丽,范国强.  河南农业大学学报. 2012(05)
[4]苹果MSAP技术体系的优化及其应用[J]. 吕晓婷,赵春梅,王爱华,戴洪义.  中国农学通报. 2012(22)
[5]三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选[J]. 高寰,张铮,周婷,曹向然,陈阳洋,王喆之.  中草药. 2012(03)
[6]表观遗传学研究进展[J]. 李光雷,喻树迅,范术丽,宋美珍,庞朝友.  生物技术通报. 2011(01)
[7]基于AFLP分析的山核桃群体结构及遗传多样性[J]. 沈林,郭金剑,李阳,曾燕如.  福建林业科技. 2009(04)
[8]杉木亲本自交系及其杂交种DNA甲基化和表观遗传变异[J]. 洪舟,施季森,郑仁华,杨立伟,陈孝丑,翁玉榛,黄金华.  分子植物育种. 2009(03)
[9]植物DNA甲基化及其研究策略[J]. 南楠,曾凡锁,詹亚光.  植物学通报. 2008(01)
[10]植物DNA甲基化及其表观遗传作用[J]. 陈小强,王春国,李秀兰,宋文芹,陈瑞阳.  细胞生物学杂志. 2007(04)

博士论文
[1]核桃砧木对树体影响的DNA甲基化调控机制研究[D]. 周贝贝.中国林业科学研究院 2014
[2]5’CpG岛甲基化检测基因芯片的研究[D]. 周东蕊.南京农业大学 2005

硕士论文
[1]平菇主栽品种DNA甲基化敏感扩增多态性（MSAP）分析[D]. 刘冰.华中农业大学 2013
[2]山核桃群体结构及多样性的研究[D]. 郭金剑.浙江林学院 2008



本文编号：3051162