柑橘属植物（Citrus L.）多甲氧基黄酮含量检测、单体纯化及其抗疲劳机理研究
发布时间：2021-02-27 20:38
中国是柑橘属植物最重要的起源地,具有丰富的柑橘资源。有关我国柑橘资源的研究虽然经历了半个多世纪,但对地方柑橘品种多甲氧基黄酮的研究仍缺乏相对应的研究支持。多甲氧基黄酮是柑橘类水果特有的一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗心血管疾病、抗癌等众多生物活性功能。此外,较黄烷酮相比多甲氧基黄酮良好的口服吸收利用率,使得多甲氧基黄酮有着更好的临床研究潜力。但是由于同分异构现象明显,多甲氧基黄酮单体的制备普遍存在分离方法繁琐、纯化效率不高、制备过程环境污染等问题。因此,弄清我国地方特有柑橘品种中多甲氧基黄酮的种类与含量,建立绿色、高效的多甲氧基黄酮制备方法,是未来研究柑橘属植物多甲氧基黄酮与地方柑橘资源科学利用亟需解决的关键问题。疲劳使机体处于亚健康状态,会导致机体免疫力下降、扰乱内分泌与神经系统稳定、诱发心脑血管等疾病,严重危害人们的健康。线粒体是机体能量供应的主要细胞器,也是活性氧产生的主要场所。其功能的改善不仅可以增加组织能量的供应,还能够增加组织氧化耐受能力,线粒体已成为抗疲劳研究的重要靶向细胞器。近期的研究发现,天然酚类化合物能够通过激活肌肉组织中某些蛋白的表达,改善肌肉线粒体的功能拮...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 柑橘多甲氧基黄酮研究概况
1.1.1 柑橘资源
1.1.2 多甲氧基黄酮
1.2 多甲氧基黄酮的提取方法
1.3 多甲氧基黄酮的检测技术
1.4 多甲氧基黄酮的分离纯化
1.5 多甲氧基黄酮单体的生物活性研究
1.5.1 抗氧化活性
1.5.2 抗炎活性
1.5.3 抗癌活性
1.5.4 调解代谢综合症
1.5.5 脑保护作用
1.6 疲劳及其发生机制
1.7 类黄酮抗疲劳研究
第2章 引言
2.1 研究目的与意义
2.2 研究内容
2.3 技术路线
第3章 我国十三种地方特有柑橘品种多甲氧基黄酮组分与含量的检测分析
3.1 研究材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验主要药品与试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 研究方法
3.2.1 标准品溶液的制备
3.2.2 类黄酮测定方法的方法学验证
3.2.3 样品的预处理
3.2.4 样品类黄酮的提取
3.2.5 色谱条件
3.2.6 统计分析
3.3 实验结果
3.3.1 UPLC-PDA方法学验证
3.3.2 十三种柑橘材料果皮中多甲氧基黄酮的组分
3.3.3 十三种柑橘材料果皮中多甲氧基黄酮的含量
3.3.4 品种间多甲氧基黄酮的相关性分析以及主成分分析
3.4 讨论
3.4.1 柑橘属基本类型间多甲氧基黄酮组分与含量的分析
3.4.2 同一类型不同品种间多甲氧基黄酮组分与含量的分析
3.4.3 柑橘属植物多甲氧基黄酮资源的利用
3.5 本章小结
第4章 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮单体的分离纯化与鉴定
4.1 研究材料
4.1.1 柑橘材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 研究方法
4.2.1 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮的提取
4.2.2 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮的富集纯化
4.2.3 多甲氧基黄酮单体的分离制备
4.2.4 多甲氧基黄酮单体的鉴定
4.2.5 统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 大孔树脂的筛选
4.3.2 HPD100型大孔树脂对多甲氧基黄酮的静态吸附和解吸分析
4.3.3 HPD100型大孔树脂对多甲氧基黄酮的吸附热力学分析
4.3.4 HPD100型大孔树脂的动态吸附与解吸附
4.3.5 HPD100型大孔树脂纯化后粗提物中多甲氧基黄酮的组分及含量变化
4.3.6 分离纯化结果及其单体鉴定
4.4 讨论
4.4.1 大孔树脂对多甲氧基黄酮的吸附与除杂
4.4.2 柑橘果皮多甲氧基黄酮单体的制备与鉴定
4.5 本章小结
第5章 大红袍红橘多甲氧基黄酮抗疲劳体外单体筛选及其体内药效学验证
5.1 研究材料
5.1.1 实验细胞与动物
5.1.2 实验药品与试剂
5.1.3 实验仪器
5.2 研究方法
5.2.1细胞实验
5.2.2 细胞活力检测
5.2.3 实时荧光定量Real-time PCR
5.2.4 免疫印记Western Bloting
5.2.5 动物实验
5.2.6 血乳酸检测
5.2.7 肌肉糖原检测
5.2.8 腓肠肌透射电镜
5.2.9 免疫组化
5.2.10 数据分析
5.3 实验结果
5.3.1 C2C12 细胞分化结果及其鉴定
5.3.2 五种多甲氧基黄酮对C2C12 肌管细胞活性的影响
5.3.3 五种多甲氧基黄酮对C2C12 肌管细胞线粒体新生的影响
5.3.4 橘皮素提高C2C12 肌管细胞线粒体新生通路相关基因的表达
5.3.5 橘皮素激活AMPK启动线粒体新生通路的发生
5.3.6 橘皮素通过能量调节途径影响AMPK的活化
5.3.7 橘皮素激活AMPK-PGC1-α-NRF1-TFAM信号轴增加C2C12 肌管细胞线粒体生物发生
5.3.8 橘皮素改善小鼠身体表现延迟疲劳发生
5.3.9 橘皮素减少小鼠血乳酸的水平增加肌肉糖原的储备
5.3.10 橘皮素改善小鼠腓肠肌线粒体数量与体积
5.3.11 橘皮素激活小鼠腓肠肌AMPK-PGC1-α-NRF1-TFAM信号通路
5.4 讨论
5.5 本章小结
第6章 总结与展望
6.1 本研究结论
6.2 研究创新
6.3 思考与展望
参考文献
附录
致谢
发表论文和主研课题
【参考文献】：
期刊论文
[1]大孔树脂AB-8分离纯化伦晚脐橙总黄酮[J]. 聂超,赵梓燕,徐晓丹,周志钦. 食品工业科技. 2017(18)
[2]Cellular metabolic energy modulation by tangeretin in 7,12-dimethylbenz（a） anthracene-induced breast cancer[J]. Kuppusamy Periyasamy,Venkatachalam Sivabalan,Kuppusamy Baskaran,Kannayiram Kasthuri,Dhanapal Sakthisekaran. The Journal of Biomedical Research. 2016(02)
[3]枳壳中黄酮类成分的分离与鉴定[J]. 丁邑强,熊英,周斌,邓敏芝,邓可众. 中国中药杂志. 2015(12)
[4]大孔树脂分离纯化陈皮中多甲氧基黄酮类化合物[J]. 刘韶,阳秀娟. 天然产物研究与开发. 2014(10)
[5]中国特有柑橘属植物基本类型不同组织类黄酮含量分析[J]. 李利改,席万鹏,张元梅,焦必宁,周志钦. 中国农业科学. 2013(22)
[6]柑橘果品营养学研究现状[J]. 丁晓波,张华,刘世尧,廖益均,周志钦. 园艺学报. 2012(09)
[7]大孔树脂纯化柑橘皮渣类黄酮的工艺研究[J]. 汪洋,吴剑,曾凡坤. 食品工业. 2011(10)
[8]从28届国际园艺学大会看果蔬园艺产品营养学研究现状[J]. 芦琰,周志钦. 园艺学报. 2011(09)
[9]橘红素增强5-氟尿嘧啶抑制人胃癌AGS细胞增殖的作用及其机制研究[J]. 鲁岚,董杨,施建蓉,吴大正. 中国药理学通报. 2011(06)
[10]论果品营养学[J]. 靖丽,周志钦. 果树学报. 2011(01)
博士论文
[1]基于柑橘皮渣及果胶的新型微纳米材料研制及其应用研究[D]. 张文林.西南大学 2017
[2]金柑（Fortunella Swingle）乙醇提取物防治代谢综合征及其主要酚类物质抗癌活性的研究[D]. 谭飔.西南大学 2016
[3]二氢杨梅素和杨梅素对急性低氧条件下运动能力的保护效应及机制研究[D]. 邹丹.第三军医大学 2016
[4]燕麦β-葡聚糖的体内代谢和抗运动疲劳作用机制研究[D]. 徐超.西北农林科技大学 2013
[5]广陈皮黄酮类化合物和挥发油成分及其活性研究[D]. 高蓓.华中农业大学 2011
[6]人参多糖抗疲劳和抗抑郁作用及其机制的研究[D]. 王佳.东北师范大学 2010
[7]槲皮素抗疲劳作用及其相关机制的实验研究[D]. 吴健全.中国人民解放军军事医学科学院 2010
[8]锦橙皮中多甲氧基黄酮抑菌抗氧化活性研究[D]. 姚晓琳.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]柑橘果实多甲氧基黄酮的提取、富集与分离纯化方法研究[D]. 赵梓燕.西南大学 2018
[2]冻绿果实中黄酮提纯及抗氧化性研究[D]. 王小璐.山西大学 2017
[3]柑橘果皮中多甲氧基黄酮的提取、分离及抗氧化活性研究[D]. 韩丹丹.沈阳农业大学 2016
[4]大豆异黄酮抗疲劳作用及相关机制的实验研究[D]. 邓炳楠.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[5]枸杞叶总黄酮对小鼠抗疲劳作用的研究[D]. 岳明霞.兰州大学 2015
[6]香菇（Lentinus edodes）对小鼠抗疲劳、耐缺氧及抗氧化作用的研究[D]. 陈慧婵.南京农业大学 2014
[7]荷叶总黄酮提取纯化工艺及减肥降脂作用的研究[D]. 薛冬娜.西南大学 2008
[8]枳实中黄酮类化合物的提取、分离、鉴定与生物活性研究[D]. 王巧能.浙江工商大学 2008
本文编号：3054771
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 柑橘多甲氧基黄酮研究概况
1.1.1 柑橘资源
1.1.2 多甲氧基黄酮
1.2 多甲氧基黄酮的提取方法
1.3 多甲氧基黄酮的检测技术
1.4 多甲氧基黄酮的分离纯化
1.5 多甲氧基黄酮单体的生物活性研究
1.5.1 抗氧化活性
1.5.2 抗炎活性
1.5.3 抗癌活性
1.5.4 调解代谢综合症
1.5.5 脑保护作用
1.6 疲劳及其发生机制
1.7 类黄酮抗疲劳研究
第2章 引言
2.1 研究目的与意义
2.2 研究内容
2.3 技术路线
第3章 我国十三种地方特有柑橘品种多甲氧基黄酮组分与含量的检测分析
3.1 研究材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验主要药品与试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 研究方法
3.2.1 标准品溶液的制备
3.2.2 类黄酮测定方法的方法学验证
3.2.3 样品的预处理
3.2.4 样品类黄酮的提取
3.2.5 色谱条件
3.2.6 统计分析
3.3 实验结果
3.3.1 UPLC-PDA方法学验证
3.3.2 十三种柑橘材料果皮中多甲氧基黄酮的组分
3.3.3 十三种柑橘材料果皮中多甲氧基黄酮的含量
3.3.4 品种间多甲氧基黄酮的相关性分析以及主成分分析
3.4 讨论
3.4.1 柑橘属基本类型间多甲氧基黄酮组分与含量的分析
3.4.2 同一类型不同品种间多甲氧基黄酮组分与含量的分析
3.4.3 柑橘属植物多甲氧基黄酮资源的利用
3.5 本章小结
第4章 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮单体的分离纯化与鉴定
4.1 研究材料
4.1.1 柑橘材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 研究方法
4.2.1 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮的提取
4.2.2 大红袍红橘果皮多甲氧基黄酮的富集纯化
4.2.3 多甲氧基黄酮单体的分离制备
4.2.4 多甲氧基黄酮单体的鉴定
4.2.5 统计分析
4.3 实验结果
4.3.1 大孔树脂的筛选
4.3.2 HPD100型大孔树脂对多甲氧基黄酮的静态吸附和解吸分析
4.3.3 HPD100型大孔树脂对多甲氧基黄酮的吸附热力学分析
4.3.4 HPD100型大孔树脂的动态吸附与解吸附
4.3.5 HPD100型大孔树脂纯化后粗提物中多甲氧基黄酮的组分及含量变化
4.3.6 分离纯化结果及其单体鉴定
4.4 讨论
4.4.1 大孔树脂对多甲氧基黄酮的吸附与除杂
4.4.2 柑橘果皮多甲氧基黄酮单体的制备与鉴定
4.5 本章小结
第5章 大红袍红橘多甲氧基黄酮抗疲劳体外单体筛选及其体内药效学验证
5.1 研究材料
5.1.1 实验细胞与动物
5.1.2 实验药品与试剂
5.1.3 实验仪器
5.2 研究方法
5.2.1细胞实验
5.2.2 细胞活力检测
5.2.3 实时荧光定量Real-time PCR
5.2.4 免疫印记Western Bloting
5.2.5 动物实验
5.2.6 血乳酸检测
5.2.7 肌肉糖原检测
5.2.8 腓肠肌透射电镜
5.2.9 免疫组化
5.2.10 数据分析
5.3 实验结果
5.3.1 C2C12 细胞分化结果及其鉴定
5.3.2 五种多甲氧基黄酮对C2C12 肌管细胞活性的影响
5.3.3 五种多甲氧基黄酮对C2C12 肌管细胞线粒体新生的影响
5.3.4 橘皮素提高C2C12 肌管细胞线粒体新生通路相关基因的表达
5.3.5 橘皮素激活AMPK启动线粒体新生通路的发生
5.3.6 橘皮素通过能量调节途径影响AMPK的活化
5.3.7 橘皮素激活AMPK-PGC1-α-NRF1-TFAM信号轴增加C2C12 肌管细胞线粒体生物发生
5.3.8 橘皮素改善小鼠身体表现延迟疲劳发生
5.3.9 橘皮素减少小鼠血乳酸的水平增加肌肉糖原的储备
5.3.10 橘皮素改善小鼠腓肠肌线粒体数量与体积
5.3.11 橘皮素激活小鼠腓肠肌AMPK-PGC1-α-NRF1-TFAM信号通路
5.4 讨论
5.5 本章小结
第6章 总结与展望
6.1 本研究结论
6.2 研究创新
6.3 思考与展望
参考文献
附录
致谢
发表论文和主研课题
【参考文献】：
期刊论文
[1]大孔树脂AB-8分离纯化伦晚脐橙总黄酮[J]. 聂超,赵梓燕,徐晓丹,周志钦. 食品工业科技. 2017(18)
[2]Cellular metabolic energy modulation by tangeretin in 7,12-dimethylbenz（a） anthracene-induced breast cancer[J]. Kuppusamy Periyasamy,Venkatachalam Sivabalan,Kuppusamy Baskaran,Kannayiram Kasthuri,Dhanapal Sakthisekaran. The Journal of Biomedical Research. 2016(02)
[3]枳壳中黄酮类成分的分离与鉴定[J]. 丁邑强,熊英,周斌,邓敏芝,邓可众. 中国中药杂志. 2015(12)
[4]大孔树脂分离纯化陈皮中多甲氧基黄酮类化合物[J]. 刘韶,阳秀娟. 天然产物研究与开发. 2014(10)
[5]中国特有柑橘属植物基本类型不同组织类黄酮含量分析[J]. 李利改,席万鹏,张元梅,焦必宁,周志钦. 中国农业科学. 2013(22)
[6]柑橘果品营养学研究现状[J]. 丁晓波,张华,刘世尧,廖益均,周志钦. 园艺学报. 2012(09)
[7]大孔树脂纯化柑橘皮渣类黄酮的工艺研究[J]. 汪洋,吴剑,曾凡坤. 食品工业. 2011(10)
[8]从28届国际园艺学大会看果蔬园艺产品营养学研究现状[J]. 芦琰,周志钦. 园艺学报. 2011(09)
[9]橘红素增强5-氟尿嘧啶抑制人胃癌AGS细胞增殖的作用及其机制研究[J]. 鲁岚,董杨,施建蓉,吴大正. 中国药理学通报. 2011(06)
[10]论果品营养学[J]. 靖丽,周志钦. 果树学报. 2011(01)
博士论文
[1]基于柑橘皮渣及果胶的新型微纳米材料研制及其应用研究[D]. 张文林.西南大学 2017
[2]金柑（Fortunella Swingle）乙醇提取物防治代谢综合征及其主要酚类物质抗癌活性的研究[D]. 谭飔.西南大学 2016
[3]二氢杨梅素和杨梅素对急性低氧条件下运动能力的保护效应及机制研究[D]. 邹丹.第三军医大学 2016
[4]燕麦β-葡聚糖的体内代谢和抗运动疲劳作用机制研究[D]. 徐超.西北农林科技大学 2013
[5]广陈皮黄酮类化合物和挥发油成分及其活性研究[D]. 高蓓.华中农业大学 2011
[6]人参多糖抗疲劳和抗抑郁作用及其机制的研究[D]. 王佳.东北师范大学 2010
[7]槲皮素抗疲劳作用及其相关机制的实验研究[D]. 吴健全.中国人民解放军军事医学科学院 2010
[8]锦橙皮中多甲氧基黄酮抑菌抗氧化活性研究[D]. 姚晓琳.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]柑橘果实多甲氧基黄酮的提取、富集与分离纯化方法研究[D]. 赵梓燕.西南大学 2018
[2]冻绿果实中黄酮提纯及抗氧化性研究[D]. 王小璐.山西大学 2017
[3]柑橘果皮中多甲氧基黄酮的提取、分离及抗氧化活性研究[D]. 韩丹丹.沈阳农业大学 2016
[4]大豆异黄酮抗疲劳作用及相关机制的实验研究[D]. 邓炳楠.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[5]枸杞叶总黄酮对小鼠抗疲劳作用的研究[D]. 岳明霞.兰州大学 2015
[6]香菇（Lentinus edodes）对小鼠抗疲劳、耐缺氧及抗氧化作用的研究[D]. 陈慧婵.南京农业大学 2014
[7]荷叶总黄酮提取纯化工艺及减肥降脂作用的研究[D]. 薛冬娜.西南大学 2008
[8]枳实中黄酮类化合物的提取、分离、鉴定与生物活性研究[D]. 王巧能.浙江工商大学 2008
本文编号：3054771
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3054771.html
