一种食用菌原生质体制备新方法

发布时间：2021-03-06 02:50

　　建立了一种原生质体制备新方法,通过研究接种块数量和酶解时间对香菇（Lentinula edodes）和金针菇（Flammulina filiformis）原生质体制备的影响,对该方法进行了优化并利用该方法制备了糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）、双孢蘑菇（Agaricus bisporus）和中国美味蘑菇（A.sinodeliciosus）原生质体。结果表明:在铺有玻璃纸的PDA平板（直径90 mm）上分别接种7个香菇、金针菇菌丝块（直径4 mm）,培养3 d后将带有菌丝体的玻璃纸转移到另一个无菌培养皿中,直接在菌丝上滴加3 mL1.5%（W∶V）溶壁酶溶液,酶解60 min,单个平板制备的原生质体数量为10⁶～10⁷个。使用该方法成功地制备了糙皮侧耳、双孢蘑菇和中国美味蘑菇原生质体。该方法与常用的原生质体制备方法相比具有制备时间短、操作简单和不易污染的优点。 

【文章来源】：食用菌学报. 2020,27(04)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

直接在玻璃纸上对菌丝进行酶解

图1 直接在玻璃纸上对菌丝进行酶解接种7个香菇或金针菇菌丝块(直径4 mm)于铺有玻璃纸的PDA平板上,在(25±1) ℃条件下避光培养,待菌落的菌丝相互接触时,无菌操作用镊子将带有菌落的玻璃纸菌丝面朝上放入已加1 mL 0.6 mol·L-1甘露醇溶液的培养皿中,随后用8～10 mL的0.6 mol·L-1甘露醇溶液润洗菌落2次,去掉多余的液体,在菌丝上滴加3 mL用0.6 mol·L-1甘露醇溶液配制的1.5%(W∶V)溶壁酶溶液(图1),然后在30 ℃培养箱中酶解,每隔30 min将培养皿置于显微镜下观察菌丝原生质体释放情况并拍照,然后放回培养箱中继续酶解,总计酶解180 min。酶解结束后将酶解液分别转移到2个2 mL的离心管内,在4 ℃、876 g条件下离心20 min,弃上清液后将沉淀重新悬浮于200 μL 0.6 mol·L-1的甘露醇溶液中制备原生质体悬浮液,用血球计数板计数原生质体的数量,计算每毫升悬浮液中原生质体数量。

在铺有玻璃纸的PDA平板上分别接种7个糙皮侧耳菌株‘新秀1号’、双孢蘑菇菌株‘A15’和中国美味蘑菇菌株‘1705’菌丝块(直径4 mm),分别培养3、3、4 d后,直接在玻璃纸上进行酶解,酶解时间为60 min,原生质体制备其他步骤参照1.4。2 结果与分析

【参考文献】：
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本文编号：3066308