欧李再生体系的建立和NAC1基因功能的初步研究

发布时间：2021-03-15 17:45

　　欧李（Cerasus humilis）为蔷薇科樱桃属果树,是多年生落叶矮生灌木,它抗寒、耐旱、耐瘠薄、耐盐碱,具有固土保水、防止沙尘、减少地表径流的作用,适应性很强,是优良的生态树种。但目前有关欧李的抗旱机制还尚不明确,本研究首先通过组织培养技术成功建立了欧李的再生体系,试验分别以叶片、茎段为外植体,通过诱导愈伤组织和促进腋芽生枝能力两种途径对欧李（怀柔）进行快繁。同时,基于欧李抗旱性强的特点,我们从前期获得的欧李转录组数据出发,从欧李叶片中克隆并获得全长NAC基因,并初步进行了功能的研究。本研究一方面通过成功建立欧李快繁技术,为后续欧李的遗传转化体系的构建奠定基础,另一方面通过对NAC基因的初步研究,为揭示欧李抗旱的分子机制提供线索。主要研究结果如下：1、通过诱导愈伤组织成功建立了欧李的再生体系（1）外植体的最适消毒条件是：外植体在流水下冲洗30min,75%酒精表面消毒1.0min,1%NaClO消毒4min,无菌水涮洗6-7次。（2）以叶片为外植体诱导愈伤组织的最适培养基为：MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂粉+1.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA;以茎段为外植体诱导愈伤... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 欧李
    1.2 欧李再生体系的建立
    1.3 NAC基因的研究进展
    1.4 研究的内容
    1.5 研究的技术路线
    1.6 研究的技术路线
2 欧李再生体系的建立
    2.1 实验材料
    2.2 实验试剂和仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 外植体最适消毒条件的摸索
        2.3.2 诱导愈伤组织途径
        2.3.3 促进腋芽生枝途径最适PGR浓度配比摸索
        2.3.4 芽诱导生根阶段最适PGR浓度配比摸索
    2.4 结果
        2.4.1 外植体最适消毒条件的摸索结果
        2.4.2 愈伤组织诱导途径结果
        2.4.3 促进腋芽生枝途径最适PGR浓度配比摸索结果
        2.4.4 芽诱导生根阶段最适PGR浓度配比摸索结果
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
3 欧李NACl基因克隆及植物表达载体构建
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料与培养
    3.2 实验方法
        3.2.1 欧李总RNA提取
        3.2.2 欧李总RNA的消化及纯化
        3.2.3 反转录合成cDNA
        3.2.4 欧李NAC1基因片段的cDNA克隆和测序
        3.2.5 植物表达载体pROK2-ChNAC1的构建
        3.2.6 欧李ChNAC1基因的生物信息学分析
    3.3 实验结果和分析
        3.3.1 ChNAC1植物高效表达载体构建
        3.3.2 NAC1基因的序列分析
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
4 欧李ChNAC1基因功能的初步研究
    4.1 实验材料
    4.2 试验方法
        4.2.1 植物表达载体转化农杆菌
        4.2.2 拟南芥的培养
        4.2.3 农杆菌遗传转化拟南芥
        4.2.4 转基因植株的检测
        4.2.5 转基因植株的形态学观察
        4.2.6 干旱胁迫下转基因植株叶绿素含量测定
        4.2.7 外源ABA对植株根发育的影响
    4.3 结果与分析
        4.3.1 农杆菌EHA105浸染菌株鉴定
        4.3.2 ChNAC1转基因拟南芥获得
        4.3.3 ChNAC1转基因拟南芥的PCR鉴定
        4.3.4 ChNAC1转基因拟南芥形态特征
        4.3.5 干旱胁迫下转基因植株叶绿素含量变化
        4.3.6 外源ABA对植株根发育的影响结果
        4.3.7 NAC1基因的表达分析
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]欧李离体叶片再生体系的建立[J]. 姚婷,张开春,闫国华,王晶,张晓明.  果树学报. 2012(04)
[2]钙果不定芽生根诱导研究[J]. 徐立,李志英.  安徽农业科学. 2008(29)
[3]钙果4号欧李组织培养技术研究[J]. 孙新政,申顺先,李庆伟,陈世昌.  果树学报. 2007(01)
[4]外源植物激素对钙果繁殖系数的影响[J]. 刘琳,钟士传.  安徽农业科学. 2005(03)
[5]欧李的组织培养与快速繁殖技术[J]. 庄丽娟,苏福才.  内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2005(01)
[6]植物激素对钙果组织培养的影响[J]. 钟士传,王侠礼,于军香,曹帮华.  山东农业大学学报(自然科学版). 2005(01)
[7]钙果(欧李)组织培养技术研究[J]. 任清盛.  中国农学通报. 2005(01)
[8]大欧李产量构成因素研究[J]. 钱国珍,苏福才,李凤艳,李巧玲,陈淑兰.  内蒙古农牧学院学报. 1998(04)
[9]欧李的组织培养[J]. 赵玉军,杜俊杰,郭黄萍,杜学梅,贺小红.  山西农业科学. 1997(03)
[10]欧李茎、叶愈伤组织的诱导及茎苗的再生[J]. 钱国珍,苏福才,牛文林.  内蒙古农牧学院学报. 1994(04)

硕士论文
[1]盐和干旱胁迫下欧李的生理响应及转录组分析[D]. 孙孟超.东北林业大学 2013
[2]钙果组织培养关键技术的研究[D]. 杜研.甘肃农业大学 2007



本文编号：3084561